金黃色葡萄球菌分子特征及耐藥相關分子標志.pdf

1、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是目前全球范圍內引起人類感染性疾病的主要病原微生物之一，簡稱金葡菌。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococeus aureus，MRSA)的出現(xiàn)是由于甲氧西林敏感金葡菌(Methicillin-sensitiveStaphylococcus aureus，MSSA)獲取了葡萄球菌盒式染色體（StaphyloccoccalCas

2、sette Chromosomemec，SCCmec）元件。成簇的規(guī)律間隔的短回文重復序列(Clustered RegularlyInterspacedShort Palindromic Repeat，CRISPR)是最近發(fā)現(xiàn)的針對噬菌體等外源基因的細菌免疫系統(tǒng)。
　　目的:
　　1.了解分離的金葡菌耐藥性、耐藥基因分布及分子特征。
　　2.了解鄭州地區(qū)分離的金葡菌spa和MLST主要流行型別，揭示該地區(qū)金葡菌分子流行

3、病學特征。
　　3.了解CRISPR/Cas系統(tǒng)的cas核心基因cas1和cas2的分布情況，初步探索金葡菌cas1和cas2與金葡菌耐藥關系。
　　方法:
　　1.采用最低抑菌濃度（MIC）對分離的金葡菌進行25種藥物敏感試驗。
　　2. PCR方法擴增介導β-內酰胺類、氨基糖苷類、紅霉素、四環(huán)素等藥物耐藥的11種耐藥基因及cas1，cas2基因，并測序分析。
　　3.多重PCR方法對MRSA進行SCCm

4、ec分型。
　　4. PCR方法進行金葡菌 spa分型，PCR產物經測序確定spa型別。PCR擴增MRSA7個管家基因，PCR產物經測序后通過查找數(shù)據(jù)庫確定ST型別。
　　5.不同菌株耐藥表型、基因型以及 cas1，cas2基因分布以百分率描述。采用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。MRSA和MSSA敏感率、耐藥基因的陽性率比較以及菌株耐藥表型、耐藥基因型、SCCmec分型與cas1，cas2基因關聯(lián)性采用χ2檢驗或Fis

5、her確切檢驗。
　　6.利用DNAstar7.0軟件的MegAlign進行序列比對同源性分析并構建系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　結果:
　　1.分離的86株金葡菌中，MRSA共28株，MSSA共58株。青霉素耐藥率最高，為95.35％，耐藥率大于50%的有11種。MRSA菌株對19種抗菌藥物的耐藥率均高于MSSA菌株。
　　2.對86株金葡菌菌耐藥基因檢測，acc(6')/aph(2'')、aph(3')-III、ant(

6、4',4")陽性率分別為100.00%、72.09%、86.05%；ermA、ermB、ermC、msrA陽性率分別為95.35%、79.07%、93.02%、58.14%；tetM、tetK陽性率為97.67%、81.40%；未檢測出blaTEM；
　　3.86株金葡菌spa分型可分為11個型別，28株MRSA的SCCmec分型共分為3個型別，MLST分為4個型別。
　　4.86株金葡菌中有44株cas1陽性，30株cas

7、2基因陽性。cas1基因在MRSA和MSSA組間以及SCCmec基因型組間差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。15種藥物的耐藥性與cas1基因的陽性率有關，2種藥物耐藥性與cas2基因的陽性率有關。cas1基因的陽性率與ermC、msrA以及tetK陽性率有關。
　　結論:
　　1.金葡菌對多種抗生素耐藥率均較高，且耐藥基因陽性率高。MRSA耐藥率普遍高于MSSA。
　　2.分離的MRSA主要有SCCmecⅠ型、SCC