鬼針草總黃酮部分化學(xué)成分研究及其抗肝纖維化活性初步篩選.pdf

1、鬼針草（Bidens bipinnata L.）是菊科鬼針草屬植物，其莖直立，葉綠色，花呈白色或黃色，種子黑色且微小。鬼針草屬植物資源豐富，約有240種分布在世界各地，主要產(chǎn)于亞洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)，常生長于村旁、路邊荒地、山坡及田間。鬼針草全草皆可入藥，是治療上呼吸道感染、咽喉腫痛、急性闌尾炎、急性黃疸型肝炎、胃腸炎、風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛、瘧疾，瘡癤、毒蛇咬傷、跌打腫痛等癥的傳統(tǒng)藥物。近年來，國內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)鬼針草具有明顯抗炎、抗肝纖維化、抗氧

2、化等作用，引起了對鬼針草研究的極大興趣。本課題組長期致力于鬼針草等藥用資源的開發(fā)利用，前期研究中已初步確定鬼針草總黃酮的抗肝纖維化作用，本研究旨在對鬼針草總黃酮提取物中的化學(xué)成分進一步分離純化，以期探究鬼針草抗肝纖維化作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為將其進一步開發(fā)為抗肝纖維化藥物提供實驗依據(jù)。
　　目的：對鬼針草總黃酮提取物中的化學(xué)成分進行分離純化，并初步篩選出具有抗肝纖維化活性的單體化合物。
　　方法：利用溶劑提取法、大孔樹脂、硅膠、S

3、ephadex LH-20、MCI樹脂、TLC、ODS等柱層析的現(xiàn)代分離技術(shù)對鬼針草總黃酮提取物進行提取分離，分離純化得到單體化合物，利用波譜技術(shù)對化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。體外培養(yǎng)肝星狀細胞（HSC-T6）、腹腔巨噬細胞（RAW264.7）并給與不同濃度的單體化合物，四甲基偶氮唑藍（MTT）法觀察各單體化合物對 HSC-T6細胞增殖的影響，ELISA方法觀察各單體化合物對RAW264.7細胞培養(yǎng)上清中IL-6、TNF-α濃度的影響。

4、　　結(jié)果：利用溶劑提取法、大孔樹脂、硅膠、Sephadex LH-20、MCI樹脂、TLC、ODS等柱層析的現(xiàn)代分離技術(shù)對鬼針草總黃酮提取物進行提取分離，分離得到15個單體化合物，利用波譜技術(shù)對化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，分別是3-羥基乙酰基吲哚（1）、山奈酚（2）、6,7,3',4'-四羥基橙酮（3）、槲皮素（4）、奧卡寧（5）、松脂素（6）、3,5,7,4'-四羥基-8-異戊烯基黃酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（7）、異奧卡寧（8）、鄰苯

5、二甲酸-雙（2'-乙基庚基)酯（9）、（2S/2R）-異奧卡寧-7-O-β-D-（2",4",6"-三乙?；┻拎咸擒眨?0/11）、1,2,13-三羥基-3,11（E）-十三二烯-5,7,9-三炔（12）、2-O-β-D-葡萄糖苷-1-羥基-3,11(E)十三二烯-5,7,9-三炔（13）、3-O-β-D-葡萄糖苷-1,14-二羥基-6,12(E)十四二烯-8,10-二炔（14）、5-（2-苯基乙炔基）-2-O-β-D-葡萄糖苷-噻

6、吩（15）。
　　MTT結(jié)果顯示，化合物2（山奈酚）、化合物4（槲皮素）、化合物6（松脂素）和化合物8（異奧卡寧）在200～12.5μmol/L濃度范圍內(nèi)體外給藥可顯著抑制HSC-T6細胞的增殖，其中化合物2（山奈酚）、化合物4（槲皮素）具有較強的抑制作用，其IC50值分別為38.41μmol/L和40.44μmol/L。 ELISA結(jié)果顯示，化合物2（山奈酚）、化合物3（6,7,3',4'-四羥基橙酮）、化合物4（槲皮素）、化合

7、物5（奧卡寧）100~12.5μmol/L體外用藥可顯著減少RAW264.7細胞上清中IL-6的分泌，化合物2（山奈酚）、化合物3（6,7,3',4'-四羥基橙酮）、化合物4（槲皮素）在濃度100~25μmol/L對RAW264.7細胞分泌TNF-α水平有抑制作用。
　　結(jié)論：從鬼針草總黃酮粗分段第Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ部分分離并經(jīng)過波普技術(shù)進行鑒定，得到15個單體化合物。其中，化合物6（松脂素），9（鄰苯二甲酸-雙（2'-乙基庚基)酯）

8、為首次從鬼針草種屬中分離得到的。其中化合物2（山奈酚）、化合物4（槲皮素）、化合物6（松脂素）和化合物8（異奧卡寧）體外給藥可顯著抑制HSC-T6細胞的增殖，且以化合物2（山奈酚）、化合物4（槲皮素）作用較強；化合物2（山奈酚）、化合物3（6,7,3',4'-四羥基橙酮）和化合物4（槲皮素）、化合物5（奧卡寧）可抑制RAW264.7細胞分泌IL-6；化合物2（山奈酚）、化合物3（6,7,3',4'-四羥基橙酮）和化合物4（槲皮素）對RA