姜黃素中樞給藥對胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生的調(diào)控作用及機制研究.pdf

1、目的:本研究通過側(cè)腦室注射姜黃素(Curcumin，Cur)，觀察其對地塞米松誘導的胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生的調(diào)控作用，并進一步研究影響糖異生的相關因素和調(diào)控信號通路，以此闡明Cur中樞給藥緩解外周糖代謝作用及可能機制，從而為其臨床轉(zhuǎn)化奠立基礎。
　　方法:1、對胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生的影響:雄性SPF級SD大鼠進行側(cè)腦室埋置導管，術后恢復一周。將側(cè)腦室埋管成功的大鼠，隨機分為對照（Control）組和造模組。造模組按1

2、 mg/kg體重皮下注射地塞米松，對照組皮下注射等量生理鹽水，1次/d，連續(xù)注射5d后，通過葡萄糖耐量(IPGTT)實驗檢測各組大鼠的血糖，將造模成功的大鼠，隨機分為模型(Dex)組和姜黃素(Dex+Cur)組。Dex+Cur組側(cè)腦室注射10μl的20 mM Cur，Control組和Dex組均側(cè)腦室注射給予等量的DMSO，1次/d，每天記錄攝食量及體重，連續(xù)注射3d后，通過IPGTT和丙酮酸耐量(IPPTT)測定，觀察Cur對胰島素抵

3、抗模型大鼠肝臟糖異生的影響。
　　2、對外周胰島素抵抗的影響與抗氧化應激的關系研究:Cur側(cè)腦室注射連續(xù)注射3d后，Western blot法檢測腦皮質(zhì)、下丘腦和肝臟組織中蛋白激酶B(PKB)的磷酸化水平(PKBser473)、核因子E2相關因子2(Nrf2)、醌氧化還原酶1(NQO-1)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB的抑制因子IkBα、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）、線粒體融合蛋白2(Mfn2)、視神經(jīng)萎縮蛋白1(OPA1)、動力相關蛋白

4、1（Drp1）、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關蛋白-1（Keap1）的蛋白表達情況。MDA試劑盒檢測腦皮層、下丘腦中MDA的含量。
　　3、對胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生的調(diào)控機制研究:Cur側(cè)腦室注射連續(xù)注射3d后，檢測血漿中游離脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)、皮質(zhì)醇及兒茶酚胺含量;Western blot法檢測磷酸烯醇式丙酮酸酸羧化酶(PEPCK)、類固醇調(diào)節(jié)相關蛋白1(SREBP1)、葡萄糖-6-磷

5、酸酶(G6pase)及碳水化合物調(diào)節(jié)相關蛋白(ChREBP)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及磷酸化AMPK蛋白表達水平。
　　結果:1、對胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生的影響:皮下注射地塞米松7d后，成功造成SD大鼠IPGTT損害并伴有IPPTT的異常升高，而Cur中樞給藥明顯緩解大鼠的IPGTT和IPPTT異常升高。
　　2、對外周胰島素抵抗的影響與抗氧化應激的關系研究:Cur中樞給藥后，與Dex組相比，腦皮質(zhì)胰島素信號蛋

6、白PKB磷酸化及炎癥抑制性調(diào)控蛋白IkBα的表達量無顯著性差異;在肝臟組織中，胰島素信號蛋白PKB磷酸化水平明顯高于Dex組，但對炎癥IkBα和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激信號蛋白GRP78均無明顯影響。Cur中樞給藥后，與Dex組相比，MDA的含量明顯低于Dex組;但WB實驗結果顯示，Cur中樞給藥對Nrf2特異調(diào)控的蛋白NQO-1、Keap1、線粒體促融合蛋白OPA1、Mfn2及促分裂蛋白Drp1均無明顯作用。
　　3、對胰島素抵抗模型大鼠肝臟

7、糖異生的調(diào)控機制研究:Cur中樞給藥后，與Dex組相比，血清中的TG、NEFA及T-CHO含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。Cur中樞干預后PEPCK、G6pase及ChREBP的蛋白表達明顯低于Dex組(P＜0.05)。與Dex組相比，Cur中樞干預后血清中的皮質(zhì)醇、兒茶酚胺含量明顯減少(P＜0.05)。
　　結論:1、 Cur中樞給藥能夠抑制地塞米松誘導胰島素抵抗模型大鼠肝臟糖異生。
　　2、Cur中樞給藥對