鱷嘴花抗肝損傷及抗HBV作用的研究.pdf

1、目的:
　　在體內(nèi)分別采用四氯化碳(CCl4)、α-荼基異硫氰酸鹽(ANIT)誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型和體外CCl4誘導(dǎo)L-O2人正常肝細(xì)胞損傷模型，并通過(guò)測(cè)定相關(guān)指標(biāo)，評(píng)價(jià)鱷嘴花(Clinacanthus nutans)(CN)對(duì)肝損傷的保護(hù)作用。采用HepG2.2.15細(xì)胞模型，測(cè)定其抗原的分泌量，評(píng)價(jià)鱷嘴花鮮榨汁含藥血清體外抑制乙型肝炎病毒(HBV)的效果。通過(guò)探討鱷嘴花的抗肝損傷及抗HBV作用，為鱷嘴花進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)

2、。
　　方法:
　　(1)鱷嘴花抗肝損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　①將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、CCl4模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、鱷嘴花鮮榨汁高、低劑量組（CN-JH組、CN-JL組）、鱷嘴花鮮藥高、低劑量組（CN-FH組、CN-FL組）及鱷嘴花干藥高、低劑量組（CN-DH組、CN-DL組），每天1次，持續(xù)給藥15天。除正常對(duì)照組外，其余各組通過(guò)腹腔注射0.1％CCl4花生油溶液進(jìn)行急性肝損傷造模實(shí)驗(yàn)。測(cè)定并比較相關(guān)指標(biāo)含量的變化及

3、觀察肝臟組織切片病理變化。
　?、趯⑿∈箅S機(jī)分為正常對(duì)照組、ANIT模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、CN-JH組、CN-JL組、CN-FH組及CN-FL組，每天1次，持續(xù)給藥15天。除正常對(duì)照組外，其余各組通過(guò)灌胃給予2％ANIT花生油溶液進(jìn)行膽汁淤積性肝損傷造模實(shí)驗(yàn)。測(cè)定并比較相關(guān)指標(biāo)含量的變化以及觀察肝臟組織切片病理變化。
　?、蹖D大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、鱷嘴花鮮榨汁組，每天2次，持續(xù)給藥3天，腹主動(dòng)脈采血，經(jīng)處理后

4、收集血清，分裝備用。
　　取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的L-O2細(xì)胞分組:正常對(duì)照組、CCl4模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、鱷嘴花鮮榨汁含藥血清低、中、高劑量組（CN-SL組、CN-SM組、CN-SH組）。除了正常對(duì)照組外，其余5組用CCl4造模6小時(shí)后終止造模，所有組加入相對(duì)應(yīng)的血清干預(yù)2小時(shí)后終止培養(yǎng)，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率及生長(zhǎng)狀態(tài)。另外，將收集好的L-O2細(xì)胞進(jìn)行勻漿，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)用酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞勻漿中GPT、GOT、MDA、SOD的含量

5、。
　　(2)鱷嘴花鮮榨汁含藥血清體外抗HBV的實(shí)驗(yàn)研究
　　將SD大鼠隨機(jī)分正常對(duì)照組、鱷嘴花鮮榨汁組。每天2次，持續(xù)給藥3天，腹主動(dòng)脈采血，經(jīng)處理后收集血清，分裝備用。
　　取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2.2.15細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。用于監(jiān)測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞上清液中標(biāo)志性抗原HBsAg、HBeAg的含量。鋪板，細(xì)胞分組:細(xì)胞對(duì)照組、鱷嘴花鮮榨汁含藥血清高、中、低劑量組（CN

6、-SH組、CN-SM組、CN-SL組）。隨時(shí)觀測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，收集上清液檢測(cè)其HBsAg、HBeAg的含量，同時(shí)采用MTT法檢測(cè)HepG2.2.15細(xì)胞的存活率。
　　結(jié)果:
　　(1)鱷嘴花可以降低CCl4肝損傷小鼠血清中ALT、AST、肝組織中MDA的含量及肝臟指數(shù)，且提升SOD及GSH-Px的活性，改善肝組織損傷程度;鱷嘴花能夠降低ANIT肝損傷小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL及肝組織中MDA的含

7、量，且提升SOD、GSH-Px的活性，改善肝組織損傷程度;鱷嘴花鮮榨汁含藥血清可以改善CCl4致?lián)p后L-O2細(xì)胞的存活率，可降低細(xì)胞勻漿中GPT、GOT、MDA的含量，提高SOD的活性。
　　(2) MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鱷嘴花鮮榨汁含藥血清對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性作用，且具有一定的時(shí)效和量效關(guān)系;鱷嘴花鮮榨汁含藥血清能抑制HepG2.2.15細(xì)胞HBsAg、HBeAg分泌量，于給藥第6天時(shí)抑制率達(dá)到高峰值。

8、r>　　結(jié)論:
　　1.鱷嘴花對(duì)體內(nèi)CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷和體外CCl4誘導(dǎo)的L-O2細(xì)胞損傷都具有一定的保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與其本身具有很強(qiáng)的抗氧化及減少脂質(zhì)代謝終產(chǎn)物的生成有關(guān)。
　　2.鱷嘴花對(duì)ANIT誘導(dǎo)小鼠膽汁淤積性損傷具有改善和干預(yù)作用，其作用機(jī)制可能與抗氧化作用，降低血清內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶，降低膽紅素，利膽退黃作用有關(guān)。
　　3.鱷嘴花鮮榨汁含藥血清在體外細(xì)胞培養(yǎng)中對(duì)HBsAg、HBeAg的分泌具有一定的抑制