藥物0412抗慢性肝損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的觀察藥物0412對(duì)CCl4誘導(dǎo)的慢性肝損傷大鼠肝功能酶譜和肝纖維化指標(biāo)的變化及病理組織學(xué)的影響，探討該藥對(duì)慢性肝損傷的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制；同時(shí)觀察大鼠慢性肝損傷的自然逆轉(zhuǎn)情況。 材料和方法采用雄性Wister大鼠，將CCl4與橄欖油(體積比4∶6)配成40％油劑，按0.3ml/100g體重腹腔注射，每周2次，第三周開始調(diào)整為0.2ml/100g體重，第四周末，將慢性肝損傷大鼠分為5組：模型對(duì)照組16只，藥物0412大

2、、中、小劑量治療組各10只，停CCl4組10只，另設(shè)正常對(duì)照組10只。第5周開始，模型對(duì)照組繼續(xù)使用CCL4，藥物0412大、中、小劑量治療組在繼續(xù)使用CCL4的同時(shí)分別以100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg(藥物0412溶于蒸餾水)灌胃，每天1次，停CCl4組停用CCL4改生理鹽水處理，維持治療20天。實(shí)驗(yàn)中常規(guī)觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、毛發(fā)光澤度、進(jìn)食以及排泄情況。第七周末，大鼠禁食禁水12小時(shí)，稱體重，抽取大鼠

3、股動(dòng)脈血并處死，處死的大鼠留取肝臟標(biāo)本，稱肝重，觀察外形、色澤、質(zhì)地和切面等情況，計(jì)算肝指數(shù)(肝濕重/體重)，并檢測(cè)肝功能指標(biāo)：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、白球蛋白比(A/G)等；肝纖維化指標(biāo)：血清透明質(zhì)酸(HA)、肝組織羥脯氨酸(Hyp)；蘇木素伊紅染色和天狼紅染色觀察肝臟組織病理學(xué)改變，參照中華肝臟病學(xué)會(huì)肝纖維化學(xué)組的慢性肝炎分級(jí)分期標(biāo)準(zhǔn)及炎癥活動(dòng)度、纖維化半定量計(jì)分系統(tǒng)進(jìn)行分級(jí)

4、和評(píng)分；并行免疫組織化學(xué)法檢測(cè)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)。 結(jié)果1.一般情況：從開始藥物0412治療至實(shí)驗(yàn)結(jié)束過程中模型對(duì)照組死亡6只，藥物0412各治療組分別死亡4只，停CCl4組死亡2只。實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組的大鼠在腹腔注射CCL4后均有趴伏，體態(tài)呆板，精神萎靡，食欲減退，行動(dòng)遲緩等現(xiàn)象，一般經(jīng)12-24小時(shí)后可恢復(fù)，并表現(xiàn)為毛發(fā)光澤度差，體重下降，多數(shù)大鼠出現(xiàn)腹瀉等癥狀。而各藥物治療組的大鼠在治療初期情況類似模型

5、對(duì)照組，治療后期情況較模型對(duì)照組為佳，體重略增長(zhǎng)。停CCl4組大鼠在停止CCL4染毒后狀態(tài)明顯好于模型對(duì)照組。正常對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)好，食欲佳，大便正常。 2.肝臟大體觀察：正常對(duì)照組被膜光滑，呈紅褐色，質(zhì)地柔軟；模型對(duì)照組肝臟與膈肌及肝小葉間粘連嚴(yán)重，呈土黃色，質(zhì)地偏硬，邊緣較鈍，胞膜表面粗糙，部分呈結(jié)節(jié)樣并附有白色膿狀物，其肝重比明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。藥物0412各治療組肝小葉間也有粘連，但程度較模型對(duì)照組輕，

6、色暗紅，質(zhì)地中等，肝重比略高于正常對(duì)照組，但明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.05)。停CCl4組的肝重比與正常對(duì)照組無差異，大體觀主要表現(xiàn)為肝小葉間粘連，色暗紅，質(zhì)地中等，邊緣略鈍。 3.與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的ALT、AST水平明顯增高(P＜0.01)，ALB水平、A/G比值明顯下降(P＜0.01)；0412各治療組與正常對(duì)照組相比，其ALT、AST水平略高于正常對(duì)照組，但無明顯差異(P＞0.05)，其ALB水平及A/G值無

7、差異(P＞0.05)；0412各治療組與模型對(duì)照組相比，其ALT、AST水平明顯降低(P＜0.01)，大、中劑量治療組ALB水平明顯高于模型對(duì)照組(P＜0.05)，各組A/G值均高于模型對(duì)照組(P＜0.01)，說明各治療組的肝功能得到明顯改善。停CCl4組的ALT、AST水平與正常對(duì)照組相比也無明顯差異，但明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.01)，其ALB水平低于正常對(duì)照組但高于模型對(duì)照組，A/G值明顯高于模型對(duì)照組(P＜0.01)。

8、 4.與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的HA水平明顯增高(P＜0.01)；0412各治療組與正常對(duì)照組之間的HA水平無差異(P＞0.05)，與模型對(duì)照組相比，其HA水平均明顯降低(P＜0.05)；停CCl4組HA水平略高于正常對(duì)照組(P＞0.05)，但明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.05)。 5.與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的肝組織Hyp水平明顯增高(P＜0.01)；0412各治療組的Hyp水平較模型對(duì)照組均明顯降低(P＜0.01)，而

9、與正常對(duì)照組之間無明顯差異(P＞0.05)。停CCl4組Hyp水平略高于正常對(duì)照組(P＞0.05)，但明顯低于模型對(duì)照組(P＜0.01)。 6.HE和天狼紅染色顯示：正常對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，匯管區(qū)無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見纖維組織增生；模型對(duì)照組可見肝細(xì)胞出現(xiàn)廣泛脂肪變性，肝組織有點(diǎn)、灶性壞死等并伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，膠原纖維組織呈明顯束狀增生，自中央靜脈及匯管區(qū)向肝小葉內(nèi)延伸、分割，形成明顯的纖維間隔；

10、藥物0412各治療組：肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，脂肪變性、纖維化病變明顯輕于模型對(duì)照組；停CCl4組病理學(xué)改變接近正常對(duì)照組，無炎癥，無脂肪變性，偶有竇周或小葉內(nèi)輕微纖維化。 7.α-SMA在正常對(duì)照組、各治療組及停CCl4組的表達(dá)局限于血管平滑肌細(xì)胞中，呈棕黃色；在模型對(duì)照組中，α-SMA還表達(dá)在匯管區(qū)及肝竇壁上。 結(jié)論藥物0412可以通過減輕肝組織損傷的形態(tài)學(xué)變化，降低血清ALT、AST、HA及肝臟組織Hyp