淫羊藿苷對(duì)cuprizone誘導(dǎo)的小鼠模型髓鞘再生的影響及機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervoussystem，CNS)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹饕±砀淖兊淖陨砻庖咝约膊。嘁园Y狀、體征的反復(fù)發(fā)作與緩解交替為特點(diǎn)。自MS開(kāi)始發(fā)病時(shí)，軸突變性、神經(jīng)元死亡等功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷的病理特征便已出現(xiàn)，并且在疾病的緩解期，該病理?yè)p傷也呈進(jìn)行性與累積性。因此，在MS的緩解期間用藥能對(duì)髓鞘、軸突的再生起到重要促進(jìn)作用。淫羊藿苷

2、(Icariin，ICA)是從傳統(tǒng)補(bǔ)腎中藥淫羊藿中提取出的有效單體成分，既往報(bào)道稱(chēng)其具有神經(jīng)保護(hù)功能、對(duì)抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)變性及提高記憶力的作用。為進(jìn)一步探究ICA對(duì)髓鞘再生修復(fù)的作用及其機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用cuprizone(CPZ)誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠制備髓鞘脫失的MS模型，從軸突完整性、成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量、神經(jīng)再生等角度觀察，探究ICA促進(jìn)髓鞘再生修復(fù)作用的可能機(jī)制，為MS治療藥物的開(kāi)發(fā)提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:

3、
　　1、以摻入含有0.2％w/w cuprizone(CPZ)的常規(guī)嚙齒類(lèi)動(dòng)物飼料飼喂C57BL/6小鼠制備急性髓鞘脫失動(dòng)物模型，飼喂5周，誘導(dǎo)其發(fā)生急性脫髓鞘和少突膠質(zhì)細(xì)胞凋亡，隨后更換為不含CPZ的常規(guī)飼料飼喂小鼠1周誘發(fā)髓鞘自行修復(fù)。實(shí)驗(yàn)分為6組:對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、CPZ模型組、CPZ+ICA6.25、12.5、25 mg/kg/day組。再生修復(fù)期間，各劑量ICA組經(jīng)口腔灌服相應(yīng)劑量的受試藥物ICA，溶媒對(duì)照組灌服IC

4、A配制溶劑（0.5％羧甲基纖維素鈉溶液），對(duì)照組和CPZ模型組均灌服等體積蒸餾水。每周記錄各組小鼠體重變化。
　　2、分別于CPZ造模5周后及再生修復(fù)1周后取小鼠腦組織，采用堅(jiān)牢藍(lán)(Luxolfast blue，LFB)染色法觀察腦內(nèi)胼胝體區(qū)的髓鞘脫失的變化;采用免疫組織化學(xué)染色法觀察髓鞘脫失和再生的形態(tài)學(xué)變化;采用免疫熒光化學(xué)染色法檢測(cè)軸突的損傷和再生修復(fù)、成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的新生以及神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF在神經(jīng)元中的表達(dá)等生物學(xué)情況

5、。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1、隨著飼喂CPZ飼料時(shí)間的延長(zhǎng)，C57BL/6J小鼠出現(xiàn)體重減輕的現(xiàn)象，將CPZ飼料撤離后，小鼠體重又恢復(fù)到與飼喂常規(guī)飼料時(shí)小鼠體重?zé)o明顯差異的水平。但I(xiàn)CA對(duì)其體重變化的影響并不顯著。飼喂CPZ飼料能夠成功誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠胼胝體區(qū)域出現(xiàn)廣泛的髓鞘脫失。在LFB染色下，對(duì)照組小鼠在胼胝體區(qū)域因?yàn)樗枨释暾词芷茐亩@藍(lán)色，CPZ模型組小鼠則無(wú)法正常著色為藍(lán)染。
　　2、CPZ能夠損傷C5

6、7BL/6J小鼠胼胝體、額葉皮層區(qū)域的髓鞘和軸突，ICA能明顯增強(qiáng)再生修復(fù)期間的髓鞘、軸突的生長(zhǎng)修復(fù)作用。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，CPZ誘導(dǎo)小鼠的胼胝體、額葉皮層區(qū)域出現(xiàn)MBP含量減低，髓鞘脫失嚴(yán)重的病理改變，這一病理改變?cè)诮?jīng)過(guò)1周的髓鞘自我再生修復(fù)后并未有所好轉(zhuǎn)，ICA能夠明顯促進(jìn)髓鞘再生修復(fù)期間髓鞘的生成、重構(gòu)，且呈劑量依賴(lài)性。免疫熒光化學(xué)染色結(jié)果則顯示，在經(jīng)過(guò)5周的CPZ飼料誘導(dǎo)后，NF200陽(yáng)性的軸突在胼胝體、額葉皮層區(qū)域出現(xiàn)

7、明顯損傷而丟失，ICA可以逆轉(zhuǎn)其丟失，促進(jìn)再生修復(fù)期間的軸突生長(zhǎng)修復(fù)。
　　3、CPZ能夠誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠額葉皮層區(qū)域成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞（髓鞘生成細(xì)胞）的凋亡，ICA能夠明顯促進(jìn)再生修復(fù)期間成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的新生。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以O(shè)lig2和APC共標(biāo)的成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞在CPZ模型組的額葉皮層中大大減少，ICA能夠通過(guò)促進(jìn)成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的新生，從而促進(jìn)髓鞘的再生修復(fù)。
　　4、CPZ誘導(dǎo)下的C57BL/6J小鼠額葉皮層