淫羊藿苷對AD細胞模型CREB及BDNF表達的影響及機制研究.pdf

1、目的:
　　阿爾茨海默病（Alzheimer'disease，AD），是一種多因素引起的進行性致死性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認知和記憶能力不斷惡化，日常生活能力進行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。老年斑(SPs)和神經(jīng)元纖維纏結(NFTs)被認為是AD關鍵的病理特征。目前多數(shù)學者認為β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)沉積成為AD發(fā)病過程中的重要因素，具有關鍵作用，是各種原因誘發(fā)AD的共同通路。 Aβ具有神經(jīng)毒

2、性，當前應用Aβ25-35片段誘導PC12細胞損傷建立AD細胞模型已被廣泛用于體外研究實驗。淫羊藿苷(icaritin，ICA)為小檗科淫羊屬植物淫羊藿的主要活性成分，具多重藥理學作用，近年來淫羊藿苷在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用及其機制研究日益增多，具有抗癡呆抗衰老、抗抑郁、改善缺血性腦損傷等作用。cAMP反應序列結合蛋白(CREB)是一種重要的核轉錄因子，調節(jié)啟動子中具有環(huán)磷酸腺苷反應單元(CRE)的基因轉錄，在神經(jīng)元再生、突觸形成及學習

3、記憶等方面具有重要的調節(jié)作用。腦源性神經(jīng)生長因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是神經(jīng)營養(yǎng)因子(NT)家族的重要成員，對外周和中樞神經(jīng)具有保護作用，不但能促進神經(jīng)元生存、生長、分化，而且在調節(jié)突觸傳遞和突觸可塑性方面發(fā)揮重要作用。體外實驗發(fā)現(xiàn)，給予神經(jīng)元亞毒性劑量的Aβ1-42，CREB信號轉導通路受阻，BDNF含量下降，進一步導致突觸功能障礙和神經(jīng)元變性。本研究以Aβ25-35誘導損傷P

4、C12細胞為AD細胞模型，探討ICA對其CREB及BDNF表達的影響。
　　方法:
　　1、細胞培養(yǎng):PC12細胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清和含100U/ml青霉素及100U/ml鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、含5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2天換液一次，藥物干預及各項指標檢測均取對數(shù)生長期的細胞。
　　2、MTT比色法:實驗分control組、Aβ組、ICA組、LY組、LY+ICA組。除control組外，余下四

5、組Aβ的濃度均為20μmol/L; ICA組:先加ICA孵育1小時后再加Aβ，ICA濃度為20μmol/L; LY組的LY294002濃度為50μmol/L; LY+ICA組為先加LY294002濃度為50μmol/L孵育1h，再加ICA和Aβ使其濃度為20μmol/L。
　　3、Western blot檢測:實驗分組同(2)，測定各組p-CREB(Ser133)/CREB、BDNF、p-Akt(Ser473)/Akt的蛋白表達。

6、
　　結果:
　　1、與control組比較，Aβ25-35處理使PC12細胞存活率明顯降低，差異有顯著性（P＜0.01）;與Aβ組比較，ICA預處理能提高PC12細胞存活率，差異有顯著性(P＜0.01);與ICA組比較，ICA+LY組PC12細胞存活率下降，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　2、與Control組比較，Aβ25-35處理使PC12細胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白表達下降，差異有統(tǒng)計學

7、意義(P＜0.05);與Aβ組相比，ICA組能夠明顯增加模型細胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白的表達，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);與ICA組相比，ICA+LY組P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白的表達下調，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　結論:
　　1.經(jīng)Aβ25-35誘導的PC12細胞存活率明顯下降。ICA可明顯改善Aβ25-35誘導的PC12細胞存活率。
　　2.經(jīng)PI3K/Akt信號通

8、路抑制劑LY294002作用后，ICA提高PC12細胞存活率的作用被明顯抑制。提示ICA可能通過PI3K/Akt信號通路發(fā)揮保護作用。
　　3.Aβ25-35能明顯下調PC12細胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白表達水平，而ICA干預后能上調上述蛋白的表達，發(fā)揮保護作用。
　　4.經(jīng)PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002作用后，ICA上調上述蛋白表達的作用被抑制，提示ICA可能通過PI3K/Akt信號通路，上