淫羊藿苷對脂多糖誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：觀察淫羊藿苷（Icariin, ICA）對脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用并探討其可能機制。
　　方法：⑴動物實驗：30只雄性SD大鼠隨機分為空白組、ICA（20 mg/kg）組、LPS（5μg）組、LPS+ICA（10 mg/kg）組和LPS+ICA（20 mg/kg）組。采用一側(cè)中腦黒質(zhì)致密部注射LPS制備多巴胺能神經(jīng)元損傷模型，大鼠每天灌胃ICA一次，連續(xù)7天。

2、通過轉(zhuǎn)棒實驗觀察大鼠行為學(xué)改變；冰凍切片免疫熒光雙標(biāo)法檢測中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷及小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況。⑵細(xì)胞實驗：原代神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)隨機分為空白組、ICA（0.1μM）組、LPS（10 ng/mL）組、LPS+ICA（0.01μM）組和LPS+ICA（0.1μM）組。細(xì)胞預(yù)先給予ICA干預(yù)30 min后加入LPS處理。通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測多巴胺能神經(jīng)元損傷及小膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀況；Western Blot檢測共培養(yǎng)中多巴胺能

3、神經(jīng)元表面特征性標(biāo)記物—酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase, TH）及小膠質(zhì)細(xì)胞表面特征性標(biāo)記物—離子鈣結(jié)合蛋白1（ionized calcium binding adaptor molecule1, Iba-1）的蛋白表達；Griess試劑和ELISA法分別檢測細(xì)胞上清液中一氧化氮（nitric oxide, NO）、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和白介素-1β（in

4、terleukin-1β, IL-1β）的含量。此外，小膠質(zhì)細(xì)胞株BV-2細(xì)胞隨機分為空白組、ICA（1μM）組、LPS（500 ng/mL）組、LPS+ICA（0.1μM）組和LPS+ICA（1μM）組，細(xì)胞預(yù)先給予ICA干預(yù)30 min后加入LPS處理，Western Blot檢測TLR4、MyD88、p65和p-p65的蛋白表達。
　　結(jié)果：①動物實驗：轉(zhuǎn)棒實驗顯示模型組轉(zhuǎn)棒時間明顯比空白組減少；經(jīng)ICA處理后轉(zhuǎn)棒時間增加。

5、大腦冰凍切片免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量明顯減少并伴有大量小膠質(zhì)細(xì)胞激活；與模型組比較，ICA能夠增加多巴胺能神經(jīng)元的數(shù)量并抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。②細(xì)胞實驗：免疫細(xì)胞化學(xué)染色和 Western blot檢測結(jié)果顯示，ICA能夠改善LPS誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷和小膠質(zhì)細(xì)胞激活。此外，ICA能夠抑制 LPS誘導(dǎo)的神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和IL-1β的增加。進一步的研究發(fā)現(xiàn)ICA能夠抑制