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文檔簡介
1、目的:觀察淫羊藿苷(Icariin, ICA)對脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷的保護作用并探討其可能機制。
方法:⑴動物實驗:30只雄性SD大鼠隨機分為空白組、ICA(20 mg/kg)組、LPS(5μg)組、LPS+ICA(10 mg/kg)組和LPS+ICA(20 mg/kg)組。采用一側(cè)中腦黒質(zhì)致密部注射LPS制備多巴胺能神經(jīng)元損傷模型,大鼠每天灌胃ICA一次,連續(xù)7天。
2、通過轉(zhuǎn)棒實驗觀察大鼠行為學(xué)改變;冰凍切片免疫熒光雙標(biāo)法檢測中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷及小膠質(zhì)細(xì)胞激活情況。⑵細(xì)胞實驗:原代神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)隨機分為空白組、ICA(0.1μM)組、LPS(10 ng/mL)組、LPS+ICA(0.01μM)組和LPS+ICA(0.1μM)組。細(xì)胞預(yù)先給予ICA干預(yù)30 min后加入LPS處理。通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測多巴胺能神經(jīng)元損傷及小膠質(zhì)細(xì)胞的激活狀況;Western Blot檢測共培養(yǎng)中多巴胺能
3、神經(jīng)元表面特征性標(biāo)記物—酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase, TH)及小膠質(zhì)細(xì)胞表面特征性標(biāo)記物—離子鈣結(jié)合蛋白1(ionized calcium binding adaptor molecule1, Iba-1)的蛋白表達;Griess試劑和ELISA法分別檢測細(xì)胞上清液中一氧化氮(nitric oxide, NO)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白介素-1β(in
4、terleukin-1β, IL-1β)的含量。此外,小膠質(zhì)細(xì)胞株BV-2細(xì)胞隨機分為空白組、ICA(1μM)組、LPS(500 ng/mL)組、LPS+ICA(0.1μM)組和LPS+ICA(1μM)組,細(xì)胞預(yù)先給予ICA干預(yù)30 min后加入LPS處理,Western Blot檢測TLR4、MyD88、p65和p-p65的蛋白表達。
結(jié)果:①動物實驗:轉(zhuǎn)棒實驗顯示模型組轉(zhuǎn)棒時間明顯比空白組減少;經(jīng)ICA處理后轉(zhuǎn)棒時間增加。
5、大腦冰凍切片免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示:與空白組比較,模型組多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量明顯減少并伴有大量小膠質(zhì)細(xì)胞激活;與模型組比較,ICA能夠增加多巴胺能神經(jīng)元的數(shù)量并抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。②細(xì)胞實驗:免疫細(xì)胞化學(xué)染色和 Western blot檢測結(jié)果顯示,ICA能夠改善LPS誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷和小膠質(zhì)細(xì)胞激活。此外,ICA能夠抑制 LPS誘導(dǎo)的神經(jīng)元-膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)上清液中NO、TNF-α和IL-1β的增加。進一步的研究發(fā)現(xiàn)ICA能夠抑制
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