過氧化氫通過MAPKs通路促進巨噬細胞中Angptl4的表達.pdf

1、血管生成素樣蛋白4(Angiopoietin-likeprotein4，Angptl4)自被發(fā)現以來，其在疾病中的作用得到越來越多的研究和重視。現已有研究表明Angptl4參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。但是其確切的作用機制仍不清楚。同樣地，大量的研究表明氧化應激與心血管疾病密切相關，但其發(fā)揮作用的途徑還需要進一步探究。隨著研究的深入，氧化應激與炎癥反應在動脈粥樣硬疾病中所起的作用進一步被揭示，已經成為探究其發(fā)病機制及尋找新的治療手段的研究

2、重點。
　　研究目的:
　　本實驗旨在探究過氧化氫(hydrogenperoxide，H2O2)對小鼠巨噬細胞株RAW264.7中血管生成素樣蛋白4(Angptl4)水平的影響以及進一步探究參與H2O2調節(jié)Angptl4表達的可能機制。
　　研究方法:
　　1.選用小鼠來源的巨噬細胞株RAW264.7;
　　2.將巨噬細胞接種至細胞培養(yǎng)板，待細胞穩(wěn)定并且貼壁，將細胞分為12組。正常對照組，H2O2刺激組(0

3、.25mmol/L)，H2O2刺激組(0.5mmol/L)，H2O2刺激組(0.25mmol/L)+U0126(20mmol/L)，H2O2刺激組(0.5mmol/L)+U0126(20mmol/L)，U0126抑制組(20mmol/L)，H2O2刺激組(0.25mmol/L)+SB203580(40mmol/L),H2O2刺激組(0.5mmol/L)+SB203580(40mmol/L),SB203580抑制組(40mmol/L)，H

4、2O2刺激組（0.25mmol/L）+SP600125(10mmol/L),H2O2刺激組(0.5mmol/L)+SP600125(10mmol/L),SP600125抑制組(10mmol/L)。
　　3.收集各組細胞并提取蛋白;收集各組培養(yǎng)基。應用細胞免疫熒光法、WesternBlot技術分別檢測各組細胞中Angptl4的表達;應用ELISA法檢測各組培養(yǎng)基中Angpt4的水平;應用WesternBlot技術檢測MAPKs通路磷

5、酸化蛋白的表達量。
　　實驗結果:
　　1.H2O2促進巨噬細胞RAW264.7中Angptl4的表達:研究發(fā)現不同濃度(0.25mmol/L、0.5mmol/L)的H2O2刺激RAW264.7細胞24小時，可以促進巨噬細胞中Angptl4的表達，并且呈濃度依賴性(P＜0.05)。
　　2.H2O2激活巨噬細胞RAW264.7中MAPKs通路:研究發(fā)現給予RAW264.7細胞H2O2(0.25mmol/L、0.5mmo

6、l/L)刺激24h，細胞中的磷酸化ERK1/2，p38MAPK以及JNK通路蛋白表達均增加，且呈濃度依賴性(P＜0.05)。
　　3.ERK1/2，p38MAPK通路拮抗劑抑制H2O2對Angptl4表達的影響:分別在U0126(20mmol/L)和SB203580(40mmol/L)預處理90分鐘條件下，H2O2(0.25mmol/L、0.5mmol/L)+U0126(20mmol/L)組和H2O2(0.25mmol/L、0.5

7、mmol/L)+SB203580(20mmol/L)組中的Angptl4的表達量均較單純H2O2刺激組(0.25mmol/L、0.5mmol/L)組明顯減少(P＜0.05)，而在SP600125(10mmol/L)預處理30分鐘條件下，H2O2(0.25mmol/L、0.5mmol/L)+SP600125(10mmol/L)組和H2O2刺激組(0.25mmol/L、0.5mmol/L)組相比無明顯統計學差異(P＞0.05)。