人乳頭狀瘤病毒基因型別和DNA甲基化預(yù)測(cè)子宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的前瞻性隊(duì)列研究.pdf

1、目的:
　　利用前瞻性隊(duì)列隨訪數(shù)據(jù)評(píng)估高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk humanpapillomavirus，hrHPV)基因型別和病毒DNA甲基化在預(yù)測(cè)子宮頸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)中的作用，為其應(yīng)用于HPV陽性人群的分流管理和癌前病變的隨訪監(jiān)測(cè)提供有力的科學(xué)證據(jù)。
　　方法:
　　基于在我國子宮頸癌高發(fā)區(qū)山西省襄垣縣建立的子宮頸癌篩查隊(duì)列(SPOCCSI)中2005-2014年隨訪數(shù)據(jù)，以年齡為41-51歲、具有完整子

2、宮頸的1，742名女性作為研究對(duì)象，采用PCR為基礎(chǔ)的線性探針反向雜交技術(shù)(SPF10-LiPA)對(duì)HC2檢測(cè)結(jié)果陽性的既往細(xì)胞學(xué)標(biāo)本進(jìn)行HPV基因型別檢測(cè);采用亞硫酸氫鹽-焦磷酸測(cè)序法對(duì)HPV16陽性標(biāo)本進(jìn)行病毒DNA L1區(qū)和長控制區(qū)(LCR)甲基化水平的定量檢測(cè);以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，判定隨訪過程中的疾病結(jié)局和疾病轉(zhuǎn)歸（逆轉(zhuǎn)、持續(xù)和進(jìn)展）情況。利用Kaplan-Meier方法估算不同型別hrHPV陽性者10年內(nèi)形成高度癌前病變及

3、子宮頸癌的累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型計(jì)算相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比，評(píng)估基因型別對(duì)HPV陽性人群風(fēng)險(xiǎn)分層的作用;利用Mann-Whitney U檢驗(yàn)分析HPV16 L1和LCR區(qū)DNA甲基化水平與疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)聯(lián)，評(píng)估病毒甲基化在預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展中的作用。
　　結(jié)果:
　　1.hrHPV基因型別預(yù)測(cè)子宮頸癌的累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn):(1)型別分布:隊(duì)列人群中最常見為HPV16和52型別，其他常見型別按降序排列依次為58、33、18、51、31

4、和56，HPV16感染率在隨訪過程中有下降趨勢(shì);(2)一次感染發(fā)病風(fēng)險(xiǎn):一次感染HPV16女性形成中度及以上宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變(CIN2+)的風(fēng)險(xiǎn)最高，10年內(nèi)累積發(fā)病率為47.8％（95％CI=36.0％-58.7％），HPV31與HPV16接近(46.3％，95％CI:19.6％-69.5％)，其他發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高的有HPV58、39、33、18和52，風(fēng)險(xiǎn)最低的有HPV45，51，56，59和68;(3)多次感染發(fā)病風(fēng)險(xiǎn):HPV16、

5、31、33和58感染后形成CIN2+的累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與感染次數(shù)有關(guān)，隨著感染次數(shù)增加，累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加(p＜0.001)，其他高危型HPV并未發(fā)現(xiàn)相似規(guī)律;(4)篩查效力:HPV檢測(cè)中增加基因型別可提高CIN2+的累積檢出率，篩查效力最高的型別為HPV16、31和58，一次檢測(cè)可避免60.8％ CIN2+發(fā)生;(5)型別特異性HPV伴不同病毒載量者持續(xù)感染的風(fēng)險(xiǎn):HPV16病毒載量與持續(xù)感染具有劑量效應(yīng)關(guān)系，高病毒載量組和中病毒載量組發(fā)生

6、持續(xù)性感染的風(fēng)險(xiǎn)分別約為低病毒載量組的23倍和4倍;(6)不同病毒載量的特定型別HPV感染者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn):hrHPV感染者發(fā)生CIN2+的累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與病毒載量存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，HP16/18高病毒載量組和中病毒載量組發(fā)生CIN2+的風(fēng)險(xiǎn)分別約為低病毒載量組的3倍和2倍，非16/18hrHPV感染者高病毒載量時(shí)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)與細(xì)胞學(xué)異常者相近。
　　2.HPV16 L1和LCR區(qū)甲基化預(yù)測(cè)宮頸病變轉(zhuǎn)歸:(1)橫斷面篩選CpG位點(diǎn):L

7、1區(qū)12個(gè)CpG位點(diǎn)(5602、5608、5611、5617、5709、5726、5927、6367、6389、6457、6650、7034)和LCR區(qū)2個(gè)CpG位點(diǎn)（7535和7553）甲基化水平與病變相關(guān)（所有p＜0.05）;(2)不同CpG位點(diǎn)甲基化與疾病轉(zhuǎn)歸關(guān)系:L1區(qū)位點(diǎn)6650高甲基化對(duì)不同病變?nèi)巳旱募膊∵M(jìn)展具有預(yù)測(cè)作用;LCR區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定位點(diǎn)可預(yù)測(cè)感染結(jié)局;(3)不同CpG位點(diǎn)間相關(guān)性:L1和LCR區(qū)基因片段中大多數(shù)核酸

8、位置相近的CpG位點(diǎn)甲基化水平具有較強(qiáng)的相關(guān)性;(4) DNA甲基化與病毒載量相關(guān)性:無論病變程度，L1和LCR區(qū)大部分CpG位點(diǎn)的甲基化水平與病毒載量相關(guān)性不強(qiáng)。
　　結(jié)論:
　　1.DHPV基因型別引起子宮頸癌及癌前病變的累積發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)不同，按順序依次為:HPV16、31、58、39、33、52、18、45、51、56、59、68，因此基因分型檢測(cè)分流HPV陽性人群是可行的，但如何轉(zhuǎn)診和隨訪尚需要結(jié)合不同國家對(duì)風(fēng)險(xiǎn)閾值的接

9、受程度和經(jīng)濟(jì)承受能力而定。
　　2.特定型別HPV多次感染后子宮頸癌和癌前病變的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，提示子宮頸癌定期篩檢和監(jiān)測(cè)是必要的，如若發(fā)現(xiàn)持續(xù)陽性者應(yīng)給予密切隨訪或轉(zhuǎn)診治療。
　　3.HPV基因分型檢測(cè)應(yīng)用于子宮頸癌篩查時(shí)，累積檢出子宮頸癌及癌前病變的效力隨HPV檢測(cè)型別的增加而增高，其中HPV16，31和58貢獻(xiàn)最大，這為“HPV基因分型技術(shù)為主導(dǎo)”的子宮頸癌篩查策略的制定提供技術(shù)參考。
　　4.子宮頸癌及癌前病變的