人乳頭狀瘤病毒基因型別和DNA甲基化預測子宮頸癌發(fā)病風險的前瞻性隊列研究.pdf

1、目的:
　　利用前瞻性隊列隨訪數(shù)據(jù)評估高危型人乳頭狀瘤病毒(high-risk humanpapillomavirus，hrHPV)基因型別和病毒DNA甲基化在預測子宮頸癌發(fā)病風險中的作用，為其應用于HPV陽性人群的分流管理和癌前病變的隨訪監(jiān)測提供有力的科學證據(jù)。
　　方法:
　　基于在我國子宮頸癌高發(fā)區(qū)山西省襄垣縣建立的子宮頸癌篩查隊列(SPOCCSI)中2005-2014年隨訪數(shù)據(jù)，以年齡為41-51歲、具有完整子

2、宮頸的1，742名女性作為研究對象，采用PCR為基礎的線性探針反向雜交技術(SPF10-LiPA)對HC2檢測結果陽性的既往細胞學標本進行HPV基因型別檢測;采用亞硫酸氫鹽-焦磷酸測序法對HPV16陽性標本進行病毒DNA L1區(qū)和長控制區(qū)(LCR)甲基化水平的定量檢測;以病理活檢結果為金標準，判定隨訪過程中的疾病結局和疾病轉歸（逆轉、持續(xù)和進展）情況。利用Kaplan-Meier方法估算不同型別hrHPV陽性者10年內形成高度癌前病變及

3、子宮頸癌的累積發(fā)病風險，并采用Cox比例風險模型計算相應的風險比，評估基因型別對HPV陽性人群風險分層的作用;利用Mann-Whitney U檢驗分析HPV16 L1和LCR區(qū)DNA甲基化水平與疾病轉歸的關聯(lián)，評估病毒甲基化在預測疾病進展中的作用。
　　結果:
　　1.hrHPV基因型別預測子宮頸癌的累積發(fā)病風險:(1)型別分布:隊列人群中最常見為HPV16和52型別，其他常見型別按降序排列依次為58、33、18、51、31

4、和56，HPV16感染率在隨訪過程中有下降趨勢;(2)一次感染發(fā)病風險:一次感染HPV16女性形成中度及以上宮頸上皮內瘤樣病變(CIN2+)的風險最高，10年內累積發(fā)病率為47.8％（95％CI=36.0％-58.7％），HPV31與HPV16接近(46.3％，95％CI:19.6％-69.5％)，其他發(fā)病風險較高的有HPV58、39、33、18和52，風險最低的有HPV45，51，56，59和68;(3)多次感染發(fā)病風險:HPV16、

5、31、33和58感染后形成CIN2+的累積發(fā)病風險與感染次數(shù)有關，隨著感染次數(shù)增加，累積發(fā)病風險增加(p＜0.001)，其他高危型HPV并未發(fā)現(xiàn)相似規(guī)律;(4)篩查效力:HPV檢測中增加基因型別可提高CIN2+的累積檢出率，篩查效力最高的型別為HPV16、31和58，一次檢測可避免60.8％ CIN2+發(fā)生;(5)型別特異性HPV伴不同病毒載量者持續(xù)感染的風險:HPV16病毒載量與持續(xù)感染具有劑量效應關系，高病毒載量組和中病毒載量組發(fā)生

6、持續(xù)性感染的風險分別約為低病毒載量組的23倍和4倍;(6)不同病毒載量的特定型別HPV感染者的發(fā)病風險:hrHPV感染者發(fā)生CIN2+的累積發(fā)病風險與病毒載量存在一定的劑量效應關系，HP16/18高病毒載量組和中病毒載量組發(fā)生CIN2+的風險分別約為低病毒載量組的3倍和2倍，非16/18hrHPV感染者高病毒載量時發(fā)病風險與細胞學異常者相近。
　　2.HPV16 L1和LCR區(qū)甲基化預測宮頸病變轉歸:(1)橫斷面篩選CpG位點:L

7、1區(qū)12個CpG位點(5602、5608、5611、5617、5709、5726、5927、6367、6389、6457、6650、7034)和LCR區(qū)2個CpG位點（7535和7553）甲基化水平與病變相關（所有p＜0.05）;(2)不同CpG位點甲基化與疾病轉歸關系:L1區(qū)位點6650高甲基化對不同病變人群的疾病進展具有預測作用;LCR區(qū)尚未發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定位點可預測感染結局;(3)不同CpG位點間相關性:L1和LCR區(qū)基因片段中大多數(shù)核酸

8、位置相近的CpG位點甲基化水平具有較強的相關性;(4) DNA甲基化與病毒載量相關性:無論病變程度，L1和LCR區(qū)大部分CpG位點的甲基化水平與病毒載量相關性不強。
　　結論:
　　1.DHPV基因型別引起子宮頸癌及癌前病變的累積發(fā)病風險不同，按順序依次為:HPV16、31、58、39、33、52、18、45、51、56、59、68，因此基因分型檢測分流HPV陽性人群是可行的，但如何轉診和隨訪尚需要結合不同國家對風險閾值的接

9、受程度和經(jīng)濟承受能力而定。
　　2.特定型別HPV多次感染后子宮頸癌和癌前病變的風險明顯增加，提示子宮頸癌定期篩檢和監(jiān)測是必要的，如若發(fā)現(xiàn)持續(xù)陽性者應給予密切隨訪或轉診治療。
　　3.HPV基因分型檢測應用于子宮頸癌篩查時，累積檢出子宮頸癌及癌前病變的效力隨HPV檢測型別的增加而增高，其中HPV16，31和58貢獻最大，這為“HPV基因分型技術為主導”的子宮頸癌篩查策略的制定提供技術參考。
　　4.子宮頸癌及癌前病變的