小兒支氣管哮喘中醫(yī)證候?qū)W生物標(biāo)記物代謝組學(xué)研究.pdf

1、支氣管哮喘(Bronchial asthma)是威脅兒童健康最常見(jiàn)的慢性疾病。由于環(huán)境、生活方式改變等因素，我國(guó)小兒哮喘發(fā)病呈逐年上升趨勢(shì)，造成了巨大的家庭負(fù)擔(dān)。運(yùn)用中醫(yī)藥防治小兒哮喘歷史悠長(zhǎng)，防治效果明顯，有著完善的理法方藥體系。目前兒童哮喘辨證多分為發(fā)作期、遷延期與緩解期三期，風(fēng)寒束肺證、痰熱阻肺證等八個(gè)證型。在臨床工作中，哮喘證型的判斷多依據(jù)醫(yī)師的個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，尚缺乏辨別不同證型的客觀化指標(biāo)。證候是中醫(yī)學(xué)中特有的名詞，在整個(gè)理論框架內(nèi)

2、處于核心地位。加速中醫(yī)證候規(guī)范化建設(shè)，實(shí)現(xiàn)證候的客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化，是中醫(yī)學(xué)邁向科學(xué)化、走向世界的先決條件。本研究立足于中醫(yī)證候客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化，以小兒支氣管哮喘為切入點(diǎn)，采用代謝組學(xué)技術(shù)試圖揭示小兒哮喘不同證候間的物質(zhì)基礎(chǔ)，是證候表征微觀化的一次有益的探索。
　　目的:
　　分析小兒哮喘發(fā)作期痰熱阻肺證、非痰熱阻肺證，緩解期肺脾氣虛證尿液樣本代謝譜，探尋小兒支氣管哮喘中醫(yī)證候?qū)W標(biāo)記物。
　　方法:
　　納入符合診斷標(biāo)

3、準(zhǔn)的小兒哮喘發(fā)作期痰熱阻肺證24例、非痰熱阻肺證20例，緩解期肺脾氣虛證40例，同時(shí)納入健康小兒29例設(shè)為正常組。采集各組小兒尿液標(biāo)本進(jìn)行氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Gas Chromatography-Mass Spectrometer/Mass Spectrometer，GC-MS/MS)檢測(cè)，同時(shí)將痰熱阻肺證、非痰熱阻肺證組尿液標(biāo)本進(jìn)行液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Liquid Chromatography-Mass Spectromete

4、r/Mass Spectrometer, LC-MS/MS）檢測(cè)，將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行正交偏最小二乘法(Orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA)判別分析，變量重要性投影值(Variable importance in the projection，VIP)、非參數(shù)檢驗(yàn)以及XCMS Online分析平臺(tái)篩選、確定組間差異性代謝物，同時(shí)利用MetaboAnaly

5、st平臺(tái)分析確定異常代謝通路。
　　結(jié)果:
　　各組間均能夠良好區(qū)分，一系列差異性代謝物及代謝通路被確定。
　　1.與正常組相比，哮喘發(fā)作期患兒尿中肌醇、尿酸、硬脂酸等14種物質(zhì)的含量下降，氨基丙二酸含量升高;主要涉及丙酮酸代謝，賴氨酸降解、生物合成等5條代謝通路;
　　2.與發(fā)作期非痰熱阻肺證組相比，GC-MS/MS結(jié)果顯示:痰熱阻肺證患兒尿中草酸、L-蘇氨酸、嘧啶等9種物質(zhì)的含量下降，主要涉及戊糖磷酸途徑，肌

6、醇磷酸代謝4條等代謝通路。LC-MS/MS結(jié)果顯示:痰熱阻肺證患兒尿中蛋氨酸、琥珀酸、賴氨酸、肌酸、犬尿氨酸、環(huán)腺苷酸等多種有機(jī)酸、氨基酸，以及多種脂類、酮類化合物含量下降，僅羥基吲哚乙醛含量升高，主要涉及生物素代謝、色氨酸代謝等5條代謝通路。
　　3.與肺脾氣虛證組相比，痰熱阻肺證患兒尿中氨基丙二酸、脯氨酸、苯丙氨酸、棕櫚酸等8種物質(zhì)含量升高，肌醇、尿酸、硬脂酸含量降低，主要涉及精氨酸和脯氨酸，甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸等4條代謝通