胃癌中PCBP3異常表達(dá)及其調(diào)控胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、背景:
　　胃癌是全球常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率高，嚴(yán)重威脅人類健康。近年來，胃癌的診斷和治療已經(jīng)得到了較大提高;然而，胃癌患者的預(yù)后仍然非常差，癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致其不良預(yù)后的重要原因。胃癌的發(fā)生發(fā)展是多基因參與的復(fù)雜過程，尋找并探索癌變過程中的分子機(jī)制成為胃癌研究的重要內(nèi)容，有助于為胃癌的靶向治療提供理論依據(jù)。
　　前期我們課題組通過送檢芯片并進(jìn)行高通量篩選，發(fā)現(xiàn)多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白3(poly C bindi

2、ng protein3，PCBP3)在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中表達(dá)量顯著高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織。多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白是一類RNA結(jié)合蛋白，能夠特異性結(jié)合RNA的多聚胞嘧啶區(qū)域。該家族分成兩大類:即hnRNP K/J和PCBP1-4。這些蛋白主要參與轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、mRNA穩(wěn)定性、翻譯增強(qiáng)或沉默。目前，愈來愈多研究表明，該家族在人類多種腫瘤異常表達(dá)，影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。PCBP3作為該家族成員之一，參與mu阿片受體啟動(dòng)子區(qū)的活性調(diào)節(jié)

3、，但其與腫瘤的關(guān)系尚無文獻(xiàn)報(bào)道。本課題通過檢測PCBP3在人胃癌組織中的表達(dá)，以及對胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響和異常表達(dá)機(jī)制的研究，初步揭示了PCBP3對胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移的潛在作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法:
　　收集47例新鮮的胃癌組織標(biāo)本，整理相關(guān)臨床病理資料。提取胃癌組織中RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，隨后采用RT-qPCR技術(shù)檢測組織中PCBP3的mRNA表達(dá)情況。采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測34例非腫瘤性胃黏膜石蠟標(biāo)本及97例胃癌石蠟標(biāo)本

4、中PCBP3的蛋白表達(dá)情況，并分析PCBP3的表達(dá)與胃癌患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。應(yīng)用PCBP3的干擾RNA和過表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系MKN45和BGC823，通過MTS、EdU、Transwell實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)，檢測胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡能力的改變。通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測與PCBP3的3'UTR結(jié)合的microRNA，并采用雙熒光素酶報(bào)告基因和Western blot對其進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　1.RT

5、-qPCR檢測顯示:與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織相比，PCBP3在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中表達(dá)水平明顯升高。
　　2.免疫組化檢測顯示:PCBP3的蛋白表達(dá)水平在非腫瘤性胃黏膜組織、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性胃癌組織中呈現(xiàn)逐級(jí)升高趨勢，且其表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理參數(shù)顯著相關(guān)。
　　3.細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn):干擾PCBP3，其表達(dá)水平明顯降低。隨后Transwell實(shí)驗(yàn)表明，干擾PCBP3，胃癌細(xì)胞的遷

6、移、浸潤能力較對照組明顯降低。相反，過表達(dá)PCBP3，其表達(dá)水平明顯升高，胃癌細(xì)胞的遷移、浸潤能力也明顯升高。而EdU、MTS及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，干擾或過表達(dá)PCBP3，胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡能力均沒有明顯變化。以上結(jié)果提示我們，PCBP3可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移、侵襲，而對增殖、凋亡沒有明顯影響。
　　4.PCBP3表達(dá)的上游調(diào)控研究:通過microRNA、TargetScan和miRDB等生物學(xué)軟件預(yù)測能與PCBP3的3'UTR

7、結(jié)合的microRNA，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，選定4個(gè)microRNA。經(jīng)過雙熒光素酶報(bào)告基因和Western blot進(jìn)一步驗(yàn)證，證實(shí)miR-141和miR-200a與PCBP3的3'UTR結(jié)合，負(fù)向調(diào)控PCBP3的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　本研究發(fā)現(xiàn)，PCBP3在胃癌組織中高表達(dá)，具有促進(jìn)胃癌細(xì)胞遷移、浸潤的能力。miR-141和miR-200a參與PCBP3表達(dá)的上游調(diào)控。PCBP3的表達(dá)及相關(guān)機(jī)制的探索，可能為研究胃癌進(jìn)展提