PBX3在胃癌組織中的過表達及其對胃癌細胞增殖的調(diào)控作用.pdf

1、前言：
　　胃癌(GC)是目前世界上最高發(fā)的惡性腫瘤之一，也是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。胃癌同樣也是腫瘤外科臨床上常見的腫瘤。在我國，男性胃癌發(fā)病率位于全國惡性腫瘤的第三位，女性排在第五位。盡管胃癌的早期診斷、根治性手術(shù)以及輔助治療的發(fā)展使得診斷水平在不斷提高，但是胃癌患者術(shù)后5年生存率仍低于30％。胃癌難以有效地治療，主要是由于復(fù)雜而又知之甚少的分子機制所致。近年來，中國胃癌的發(fā)病率和死亡率均保持上升趨勢。因此，研究

2、胃癌變和轉(zhuǎn)移的機理，并進一步找出胃癌預(yù)防及治療的措施是擺在科研工作者面前的迫切要求。
　　PBX3是屬于含有TALE（三氨基酸突出環(huán)）的PBX家庭成員的同源基因。已有研究表明前B淋巴細胞白血病轉(zhuǎn)錄因子(Pre-B-cellieukerniahorneobox，PBX)與腫瘤生長和腫瘤起始細胞“祖性”維持有重要作用。PBX蛋白與Hox蛋白相互作用，可以增加Hox蛋白與DNA結(jié)合的親和力，從而提高下游靶基因的轉(zhuǎn)錄作用。雖然PBX3可以

3、作為原癌基因PBX1的同源基因被克隆，但是其生物學(xué)功能及其與腫瘤的關(guān)系還知之甚少。近期人們發(fā)現(xiàn)PBX3表達量與前列腺腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，它是通過let-7D轉(zhuǎn)錄后被雄激素調(diào)節(jié)。另外一個實驗結(jié)果表明，PBX3mRNA與Let-7c水平呈負相關(guān)，PBX3可以逆轉(zhuǎn)Let-7c對結(jié)腸癌細胞生長抑制的影響。最近的研究表明，PBX3是Hoxa9在白血病生成過程中發(fā)生至關(guān)重要的輔因子。并針對它們的相互作用，使得PBX3基因過表達，這是治療急性髓系白

4、血病的一種可行的方法。在本研究中，我們調(diào)查了90例胃癌標(biāo)本的PBX3表達譜，分析其表達與臨床病理因素的關(guān)系。此外，為了明確胃癌細胞中PBX3的作用，我們研究了PBX3對AGS和SGC-7901胃癌細胞系中胃癌細胞增殖的調(diào)控作用。探討PBX3在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，為進一步的研究奠定基礎(chǔ)，進而為胃癌的診斷和治療提供新的分子靶點，也為胃癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移機制研究提供了新的視角。
　　方法：
　　1.免疫組化方法檢測PBX3在胃癌組

5、織及癌旁組織中的表達情況。
　　收集90位胃癌患者標(biāo)本，用免疫組織化學(xué)法檢測胃癌和癌旁組織中的PBX3的表達情況。
　　2.Western blot法檢測PBX3在細胞系中的蛋白表達水平。
　　培養(yǎng)胃癌細胞系BGC-823，AGS，SGC-7901，MKN-1和HGC-27，用Western Blot方法檢測PBX3蛋白的表達水平。
　　3.蛋白印跡分析。
　　PBX3轉(zhuǎn)染后，在蛋白水平上檢測PBX3對胃癌

6、細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901表達作用。
　　4.集落形成實驗。
　　PBX3轉(zhuǎn)染后檢測細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901細胞增殖數(shù)量情況。
　　5.MTT實驗。
　　PBX3轉(zhuǎn)染后檢測細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901細胞增殖速度情況。
　　6.細胞侵襲實驗。
　　PBX3轉(zhuǎn)染后檢測細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901中細胞侵潤的數(shù)量。
　　結(jié)果：
　　1.PBX3在胃癌中的表達情況。
　　(1

7、)33.3％(30/90)胃癌組織表達PBX3。
　　(2)PBX3主要定位于細胞漿中。
　　(3)PBX3的表達與胃癌的臨床分期(Ⅰ+ⅡvsⅢ，P=0.0127)相關(guān)。
　　(4)PBX3的表達與胃癌的分期(T1+T2vsT3+T4，P=0.0017)相關(guān)。
　　(5)PBX3的表達與胃癌的分化程度（低分化vs中-高分化，P=0.0158）有關(guān)。
　　2.PBX3在細胞系中的表達情況。
　　(1)P

8、BX3在胃癌細胞系SGC-7901和AGS中呈相對低表達。
　　(2)蛋白印跡分析顯示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的胃癌細胞系SGC-7901和AGS中PBX3水平顯著增加。
　　3.集落形成實驗。
　　胃癌細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901中能明顯看到轉(zhuǎn)染后PBX3質(zhì)粒的增加(P＜0.05)。
　　4.MTT實驗。
　　在胃癌細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901中PBX3過表達可以促進細胞增殖(5天:P＜0.05)。
　　5.

9、細胞侵襲實驗。
　　在胃癌細胞系A(chǔ)GS和SGC-7901中均可見PBX3轉(zhuǎn)染后增加了侵入細胞的數(shù)量;PBX3轉(zhuǎn)染增加了PCNA的表達(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　PBX3在胃癌組織中的表達與腫瘤的分化程度、侵潤深度和臨床分期密切相關(guān)，尤其是對T3、T4期的標(biāo)本，結(jié)果更明顯。PBX3是一種可以促進胃癌細胞的增殖能力和速度、提高細胞侵襲的能力的癌基因。在胃癌組織中PBX3過表達可能與腫瘤的進展有關(guān)。因此，過表達的PB