IFITM3在胃癌中的表達及其機制的研究.pdf

1、背景：胃癌(Gastric cancer，GC)是全世界發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計，全世界每年有超過750，000例新確診病例并且五年生存率不足25％，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療是提高胃癌生存率的重要措施。因此尋找新的胃癌治療靶點和早期診斷標志物是控制其發(fā)生發(fā)展的關鍵。干擾素誘導的跨膜蛋白3(IFITM3)，也稱為1-8U，是干擾素誘導跨膜蛋白家族的成員之一。它是由兩個短的具有高度相似但不同N-和C-末端的核心序列的跨膜

2、結構域蛋白(5-18 kDa)所組成。IFITM3在不同的細胞過程中起到了重要的作用，包括細胞粘附，免疫細胞調(diào)節(jié)，生殖細胞歸巢和成熟和骨礦化。
　　目的：旨在明確IFITM3在48例胃癌組織標本及細胞中的的表達水平，通過體外實驗重點探究其對胃癌細胞株遷移，侵襲，增殖和細胞周期的影響及相關的分子學機制，從而更好的探索和揭示IFITM3預防和治療胃癌的分子機理。
　　方法：⑴通過熒光實時定量PCR(qRT-PCR)方法檢測收集的

3、48例胃癌手術標本（癌組織及其相應的癌旁組織）中的IFITM3的mRNA的表達量，并進一步分析其與臨床病例資料的關系;利用qRT-PCR和蛋白免疫印跡法(western blot)分別檢測出胃癌細胞AGS、SGC-7901、BGC-823、MKN45、MKN28和正常胃粘膜上皮細胞GES-1中IFITM3的表達;使用免疫組織化學技術檢測不同病理分期的胃癌組織中IFITM3的蛋白表達。⑵利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術，建立IFITM3沉默的胃癌穩(wěn)定轉(zhuǎn)

4、染細胞株，運用細胞劃痕實驗、Transwell跨膜實驗、CCK8、流式細胞技術來觀察細胞的遷移、侵襲和增殖的能力。⑶倒置顯微鏡下觀察IFITM3干擾前后穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的形態(tài)學變化;使用熒光實時定量PCR和Western blot技術分別在RNA和蛋白水平上檢測沉默組、對照組以及正常細胞株中EMT(Epithelial-Mesenchymal Transitions，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)相關蛋白（E-Cadherin和Vimentin）的表達。⑷使

5、用熒光實時定量PCR、Western blot檢測MMP-2和MMP-9在IFITM3沉默胃癌細胞株和正常細胞中的不同表達。⑸用Wnt/β-catenin通路特異性抑制劑XAV939作用于不同濃度的胃癌細胞株，qRT-PCR和Western blot檢測β-catenin和IFITM3表達的變化。
　　結果：①發(fā)現(xiàn)IFITM3在胃癌組織中的表達量明顯高于癌旁組織，兩者差異具有統(tǒng)計學意義，通過臨床病理資料分析結果顯示:IFITM3的

6、表達量與TNM分期、區(qū)域淋巴結的轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移相關;與胃正常粘膜上皮細胞GES-1相比，胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、AGS中IFITM3表達量顯著增高，其中，在SGC-7901細胞株的表達量最高，具有統(tǒng)計學差異，而MKN28、MKN45中的表達量無統(tǒng)計學意義。②成功構建IFITM3的穩(wěn)轉(zhuǎn)干擾胃癌細胞株SGC-7901和BGC-823，CCK8實驗證明干擾IFITM3能夠抑制細胞的增值能力。流式周期實驗結果表明IFITM3

7、干擾株能夠使胃癌細胞的細胞周期停滯于G0/G1期并減少S期的細胞數(shù)。③細胞劃痕實驗，Transwell跨膜實驗表明IFITM3可以促進胃癌細胞的遷移、侵襲能力。④倒置電子顯微鏡觀察干擾IFITM3表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)胃癌細胞株，細胞形態(tài)由正常的梭形轉(zhuǎn)變成卵圓形，且偽足變少，有逆轉(zhuǎn)EMT的趨勢;熒光實時定量PCR、Western blot結果示:在RNA和蛋白水平上，IFITM3的穩(wěn)轉(zhuǎn)干擾胃癌細胞株的E-Cadherin表達量增加，Vimentin

8、表達量減少。⑤使用熒光實時定量PCR、Western blot檢測到MMP-2和MMP-9在IFITM3沉默細胞株中顯著低表達。⑥使用Wnt/β-catenin通路特異性抑制劑XAV939之后，通過熒光實時定量PCR、Western blot檢測相對于未處理組，IFITM3表達量隨β-catenin均顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：在胃癌組織中，IFITM3的高表達與腫瘤分期、淋巴結轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移密切相關，IFITM3可作