胃癌組織細(xì)胞中NGAL基因表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、近年來,許多研究表明,中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白編碼基因NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是人類的一個(gè)重要的腫瘤相關(guān)基因,在結(jié)腸癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌、皮膚癌和食管癌等腫瘤中高表達(dá),然而,在胃癌中NGAL基因的表達(dá)情況如何目前尚不清楚。在本文中,我們首先檢測(cè)了NGAL基因在胃癌組織細(xì)胞中的表達(dá)情況,其次還研究了胃癌細(xì)胞中NGAL基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。期望為全面認(rèn)識(shí)NGA

2、L基因的腫瘤生物學(xué)功能提供更多資料。
　　研究?jī)?nèi)容和方法:
　　1.采取免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)55例胃癌及其相對(duì)應(yīng)的正常胃腺上皮石蠟包埋組織樣品中NGAL基因的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　2.聯(lián)合運(yùn)用蛋白印跡和RT-PCR技術(shù)對(duì)兩種胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中NGAL基因的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　3.將NGAL基因5'側(cè)翼調(diào)控區(qū)不同長(zhǎng)度片段分別插入到質(zhì)粒pGL3-Basic中,構(gòu)建NGAL基因5'側(cè)翼調(diào)控

3、區(qū)系列熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體。
　　4.利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)研究確定,在胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中, NGAL基因啟動(dòng)子核心元件所在區(qū)域。
　　5.結(jié)合突變與缺失技術(shù),研究胃癌細(xì)胞中NGAL基因啟動(dòng)子區(qū)元件的TPA反應(yīng)性。
　　6.通過蛋白印跡技術(shù),結(jié)合生物信息學(xué)預(yù)測(cè)分析,確定胃癌細(xì)胞中NGAL基因的轉(zhuǎn)錄激活因子,初步探討TPA誘導(dǎo)NGAL基因表達(dá)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　研究結(jié)果:

4、
　　1.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明,NGAL基因在正常胃腺上皮中不表達(dá)或表達(dá)很弱,而在胃癌組織中表達(dá)很強(qiáng),陽性信號(hào)彌散于整個(gè)胞漿。
　　2.兩個(gè)胃癌細(xì)胞系中NGAL基因表達(dá)有較大差別,BGC-823中NGAL基因表達(dá)水平明顯高于SGC-7901。
　　3.雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果表明,在兩個(gè)不同的胃癌細(xì)胞系中,NGAL基因啟動(dòng)子核心元件所在區(qū)域不一樣;在BGC-823細(xì)胞中,NGAL基因啟動(dòng)子核心元件位于基因5'側(cè)翼

5、區(qū)-110~-79;在SGC-7901細(xì)胞中,NGAL基因啟動(dòng)子核心元件位于基因5'側(cè)翼區(qū)-152~-141。
　　4.研究發(fā)現(xiàn),在胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因的啟動(dòng)子均有TPA反應(yīng)性。
　　5.在胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因啟動(dòng)子的TPA反應(yīng)元件位于基因5'側(cè)翼區(qū)-85~-79。
　　6.在生物信息學(xué)預(yù)測(cè)基礎(chǔ)上,通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)確定,在胃癌細(xì)胞系BGC-82

6、3中,可能由ERK細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)途徑介導(dǎo)了NGAL基因的TPA反應(yīng)性,AP1可能是其中的轉(zhuǎn)錄激活因子。
　　結(jié)論:
　　1.胃癌組織細(xì)胞中,NGAL基因高表達(dá)。
　　2.在胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因的表達(dá)存在著較大的差別。
　　3.在胃癌細(xì)胞系BGC-823和SGC-7901中,NGAL基因啟動(dòng)子的核心元件不同。
　　4.在胃癌細(xì)胞中,NGAL基因的啟動(dòng)子有TPA反應(yīng)性,其TP