泌乳素腺瘤中干細(xì)胞標(biāo)記物和多巴胺2型受體表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　多巴胺受體激動(dòng)劑（DAs）是當(dāng)前垂體泌乳素瘤的首選治療藥物，主要靶向多巴胺2型受體（D2R）。腫瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞（TSLCs）被發(fā)現(xiàn)具有放化療抵抗的特性。我們旨在研究人和大鼠垂體泌乳素瘤中干細(xì)胞標(biāo)記物和D2R的表達(dá)特征，初步分析泌乳素腺瘤中TSLCs對(duì)DA治療的反應(yīng)性。
　　方法：
　　人垂體泌乳素腺瘤標(biāo)本（n=14）收集自經(jīng)外科手術(shù)切除的病人。將體外培養(yǎng)的大鼠垂體泌乳素腺瘤 MMQ細(xì)胞通過(guò)皮下注射的方式移植

2、入免疫缺陷的裸鼠體內(nèi)，構(gòu)建大鼠泌乳素腺瘤的異體移植瘤模型（n=9）。將人和大鼠泌乳素腺瘤標(biāo)本制成石蠟切片，對(duì)腫瘤標(biāo)本切片進(jìn)行HE染色和免疫組化泌乳素（PRL）染色，采集荷瘤小鼠和對(duì)照小鼠的靜脈血并用ELISA測(cè)定血清PRL水平。通過(guò)免疫熒光檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)記物（CD133,Nestin,Oct4,Sox2）和D2R在人與大鼠垂體泌乳素瘤標(biāo)本中的表達(dá)。在體外用DA（卡麥角林）處理MMQ細(xì)胞后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD133陽(yáng)性細(xì)胞的比例改變，we

3、stern blot檢測(cè)CD133蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果：
　　1.大鼠泌乳素腺瘤模型：荷瘤小鼠的腫瘤體積在62.78到1555.34 mm3之間，其血清PRL與對(duì)照組小鼠相比明顯升高（P＜0.001）。移植瘤的組織學(xué)特征與大鼠垂體腺瘤相似，免疫組化染色顯其PRL表達(dá)陽(yáng)性。
　　2.干細(xì)胞標(biāo)記表達(dá)：免疫熒光顯示人泌乳素腺瘤標(biāo)本中存在共表達(dá)干細(xì)胞標(biāo)記CD133和Nestin的腫瘤細(xì)胞；鼠移植瘤中也存在CD133和Nestin共陽(yáng)

4、性細(xì)胞，此外還存在Oct4和Sox2陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞。在14例人泌乳素腺瘤和9個(gè)鼠移植瘤標(biāo)本中，具有不同程度CD133陽(yáng)性表達(dá)的分別為12例和9例，Nestin陽(yáng)性表達(dá)的分別為11例和9例，有7個(gè)移植瘤標(biāo)本Oct4表達(dá)陽(yáng)性，8個(gè)Sox2表達(dá)陽(yáng)性。在所有陽(yáng)性表達(dá)的標(biāo)本中，干細(xì)胞標(biāo)記陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞所占的比例都非常低。
　　3.CD133和D2R表達(dá)：免疫熒光顯示人泌乳素腺瘤標(biāo)本中，CD133陽(yáng)性染色只能在D2R陰性而非D2R陽(yáng)性的細(xì)胞上

5、觀察到，D2R陽(yáng)性染色只能在CD133陰性而非CD133陽(yáng)性的細(xì)胞上觀察到。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)共表達(dá)CD133和D2R的腫瘤細(xì)胞。鼠移植瘤標(biāo)本中也觀察到了同樣的現(xiàn)象。
　　4.藥物干預(yù)MMQ：流式分析顯示未經(jīng)DA處理（0μM卡麥角林）的對(duì)照組MMQ細(xì)胞中CD133陽(yáng)性細(xì)胞的比例為1.13±0.36％，而經(jīng)50μM和100μM卡麥角林處理的實(shí)驗(yàn)組 MMQ細(xì)胞中，CD133陽(yáng)性細(xì)胞的比例分別增加到了2.99±0.70%和7.69±1.15%，各