垂體腺瘤中sMICA對NK和T細胞表面受體NKG2D表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：垂體腺瘤是顱內(nèi)常見的腫瘤，其發(fā)生率僅次于膠質(zhì)瘤和腦膜瘤，在顱內(nèi)腫瘤中居于第三位。而NK和CD8+T細胞可以通過其表面活化性受體NKG2D與相應(yīng)配體MICA蛋白的結(jié)合來消除病毒感染細胞和腫瘤細胞。研究表明，在許多腫瘤患者的血清中，分泌型Major Histocompatibility Complex class I-related chain A（sMICA）蛋白水平明顯高于正常人，研究者還發(fā)現(xiàn)NKG2D/MICA通路廣泛存在于上皮

2、性腫瘤中。本實驗的目的是通過比較垂體無分泌腺瘤、泌乳素腺瘤患者和正常人外周血中NK和T淋巴細胞表面活化性受體NKG2D的表達情況以及血清中sMICA分泌水平，來探討它們之間的內(nèi)在關(guān)系，以揭示可能存在的腫瘤免疫逃逸機制。 方法：選取2008年3月～2008年11月山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)外科收治的住院病人，垂體無分泌腺瘤患者23例，泌乳素腺瘤患者16例，正常人17例；收集垂體無分泌腺瘤、泌乳素腺瘤患者和正常人的抗凝血，通過紅細胞裂解法

3、和淋巴細胞分離法得到淋巴細胞PBMC；收集垂體無分泌腺瘤、泌乳素腺瘤患者和正常人的促凝血，通過離心的方法得到血清；收集上述患者相應(yīng)的腫瘤組織標(biāo)本和正常腦組織5例；培養(yǎng)殺傷實驗的靶細胞K562細胞系。 淋巴細胞PBMC通過CD56、CD3、NKG2D染色后，用流式細胞術(shù)檢測NK和T淋巴細胞表面活化性受體NKG2D表達情況（包括表達數(shù)目和熒光強兩個方面）；ELISA方法檢測患者和正常人血清中sMICA水平；相關(guān)性分析的方法來分析sM

4、ICA分泌水平與NKG2D表達情況之間的關(guān)系；RT-PCR技術(shù)檢測垂體無分泌腺瘤、泌乳素腺瘤腫瘤組織以及正常腦組織標(biāo)本中MICA基因的表達情況：細胞毒性實驗的方法檢測垂體無分泌腺瘤患者和正常人外周血中NK細胞對K562的殺傷活性。 結(jié)果：與正常人相比，垂體無分泌腺瘤和泌乳素腺瘤患者外周血中NK細胞表面的NKG2D熒光強明顯降低，T細胞表面的NKG2D數(shù)目和熒光強都明顯降低；而血清中sMICA水平顯著升高。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清中s

5、MICA水平與NK，T細胞表面的NKG2D表達數(shù)目和熒光強呈負相關(guān)；垂體無分泌腺瘤、泌乳素腺瘤腫瘤組織有MICA的表達，而正常腦組織中不存在MICA的表達；細胞毒性實驗證明，垂體無分泌腺瘤患者外周血中NK細胞的殺傷活性降低。 結(jié)論：本文首次發(fā)現(xiàn)了垂體無分泌腺瘤和泌乳素腺瘤組織中存在MICA的表達，外周血中存在sMICA水平升高以及NK和T細胞表面活化性受體NKG2D的表達水平降低；從而證明了，sMICA可以下調(diào)腫瘤患者外周血中N