HGF-c-MET信號通路在克唑替尼抑制c-MET基因擴(kuò)增的人肺腺癌細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:建立人肺腺癌細(xì)胞動(dòng)物移植瘤模型，研究克唑替尼對c-MET基因擴(kuò)增非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的抑制作用及其機(jī)制，為克唑替尼在臨床治療原發(fā)或繼發(fā)c-MET基因擴(kuò)增NSCLC的安全性及療效提供實(shí)驗(yàn)資料和科學(xué)依據(jù)。
　　方法:將裸鼠隨機(jī)分為A組即H1993細(xì)胞模型組、B組即H1993細(xì)胞克唑替尼組、C組即A549細(xì)胞模型組、D組即A549細(xì)胞克唑替尼組、E組即空白對照組。細(xì)胞懸液

2、皮下注射法建立H1993細(xì)胞及A549細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，實(shí)驗(yàn)組裸鼠每天灌胃給予克唑替尼50 mg/kg，共14天，觀察克唑替尼對裸鼠體征變化的影響。采用免疫組織化學(xué)染色法（Immunohistochemistry，IHC）觀察裸鼠移植瘤組織中肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）、c-MET及磷酸化c-MET（phosphorylated-MET，p-MET）蛋白的表達(dá)情況及克唑替尼對其表達(dá)的影響。

3、采用實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time Quantitativepolymerase chain reaction，qPCR)研究克唑替尼對裸鼠移植瘤組織中c-MET、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（serine/threonine protein kinase，AKT）的mRNA表達(dá)量的影響。采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)研究克唑替尼對裸鼠移植瘤組織HGF/c-MET及其下游信號通路磷酸化水平的影響。

4、r>　　結(jié)果:
　　1、裸鼠進(jìn)食量上，與E組相比，其余各組均有不同程度減少，其中A組最為顯著，除C組與D組外組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。裸鼠體重方面，B組與A組、C組及D組比較均有不同程度的增加(P＜0.001)，然與E組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);A組、C組及D組與E組相比，體重增長緩慢均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，其中A組最為顯著;C組與D組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、克唑替尼對H19

5、93細(xì)胞移植瘤抑制率為72.3％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);對A549細(xì)胞移植瘤抑制率為1.3％，抑制作用不明顯(P＞0.05)。
　　3、IHC檢測結(jié)果可知，HGF蛋白在A組及B組的陽性表達(dá)率和平均染色強(qiáng)度均高于C組及D組，然差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。c-MET蛋白在A組及B組的表達(dá)亦均高于C組及D組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.0001），但組內(nèi)無顯著性差異(P＞0.05)。p-MET蛋白在A組的表達(dá)顯著高于其

6、余各組(P＜0.0001)，而在B組的表達(dá)有低于其余各組的趨勢(P＞0.05)，C組、D組間無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4、B組c-MET、AKT的mRNA表達(dá)與A組差異不明顯(P＞0.05);類似地，D組與C組相比亦無明顯變化（P＞0.05）。而A組及B組的表達(dá)亦均高于C組及D組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001; P＜0.001;P＜0.05; P＜0.001)。
　　5、蛋白質(zhì)印跡法結(jié)果可知，c-MET、A

7、KT、胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)蛋白于A組及B組的表達(dá)量均顯著高于C組及D組（P＜0.001; P＜0.05; P＜0.01），而組內(nèi)表達(dá)無差異(P＞0.05);p-MET蛋白則A組表達(dá)量高于其余各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);p-AKT蛋白于A組的表達(dá)量均高于其余各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001; P＜0.05; P＜0.05);p-ERK蛋白于