CD151激活C-Met信號(hào)通路促HUVECs血管生成機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的:CD151具有促進(jìn)細(xì)胞增殖，分化及血管新生的作用。在既往的關(guān)于CD151促進(jìn)體內(nèi)外血管生成的研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討其促進(jìn)HUVECs血管生成的機(jī)制以及與C-Met，F(xiàn)AK信號(hào)通路的關(guān)系，闡明CD151在促HUVECs血管生成的作用以及對(duì)C-Met相關(guān)信號(hào)通路的影響。
　　研究方法：1.體外構(gòu)建pAAV-CD151重組質(zhì)粒，pAAV-GFP質(zhì)粒作對(duì)照；設(shè)計(jì)siRNA-CD151和siRNA-Control,Lipo2000

2、轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，36小時(shí)后Western blotting鑒定各組CD151蛋白的表達(dá)；2 CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力；3.細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力；4.Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力；5.一氧化氮檢測(cè)試劑盒檢測(cè)各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞上清中NO的含量；6.Elisa試劑盒檢測(cè)各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上清中VEGF含量；7.細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路的研究：進(jìn)一步探究CD151促進(jìn)血

3、管生成的機(jī)制（C-Met相關(guān)信號(hào)通路）。
　　研究結(jié)果：1.Lipo2000成功轉(zhuǎn)染相關(guān)質(zhì)粒和siRNA，實(shí)行對(duì)目的基因的表達(dá)調(diào)控；轉(zhuǎn)染36 h，pAAV-CD151組CD151蛋白的表達(dá)要高于pAAV-GFP組和siRNA-Control組;相對(duì)于siRNA-Control組，siRNA-CD151組CD151蛋白表達(dá)下降。2. CD151能夠明顯促進(jìn)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖；3.轉(zhuǎn)染24 h后，CD151組促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的粘附

4、能力要高于其他各組；而這一作用在siRNA-CD151組被削弱。4. CD151能夠明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷移作用，而這一作用在siRNA-CD151組被削弱。5.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染后72 h,CD151能夠明促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NO表達(dá)；6.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24 h,48 h和72 h，CD151能夠明顯促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF表達(dá)。7. CD151表達(dá)增加后，C-Met磷酸化表達(dá)增加，這一作用在siRNA-CD15