c-Met小分子酪氨酸激酶抑制劑ARQ197對(duì)肺腺癌細(xì)胞放射增敏作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究和探討c-Met小分子酪氨酸激酶抑制劑ARQ197是否對(duì)肺腺癌細(xì)胞有放射增敏作用，若具有放射增敏作用則進(jìn)一步探討其放射增敏的可能機(jī)制，為ARQ197作為增敏劑應(yīng)用于肺癌放射治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1299體外培養(yǎng)作為研究對(duì)象。首先用不同系列濃度的重組人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）和ARQ197分別處理肺腺癌細(xì)胞，應(yīng)用克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，篩選出用于放射敏感性研究的HGF和ARQ19

2、7的合適濃度。隨后將肺腺癌細(xì)胞分為以下四組：對(duì)照組、HGF處理組、ARQ197處理組、HGF和ARQ197共同處理組，應(yīng)用細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)，繪制放射后細(xì)胞存活曲線，觀察不同組別之間放射敏感性的差異。而后用 HGF單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的ARQ197分別處理肺腺癌細(xì)胞，應(yīng)用蛋白印記檢測(cè) HGF單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用不同濃度ARQ197對(duì)細(xì)胞c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表達(dá)和活化的影響。最后將肺腺癌細(xì)胞分為：對(duì)照組、ARQ197處理組，

3、觀察兩組接受2Gy照射前和照射后6h、9h c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表達(dá)和活化水平的變化。
　　結(jié)果：肺腺癌細(xì)胞的克隆形成率隨著 HGF濃度的增加呈進(jìn)行性升高，而隨著ARQ197濃度的增加則進(jìn)行性下降。放射后細(xì)胞存活曲線示對(duì)照組、HGF處理組、HGF和ARQ197共同處理組及ARQ197處理組的SF2值，A549細(xì)胞分別為48.28±2.16％、82±2.62%、41.53±1.71%和38.91±1.71%，H1

4、299細(xì)胞分別為58.41.±3.47%、85.23±6.07%、44.80±3.47%和43.30±2.96%。HGF、HGF和 ARQ197共同處理及ARQ197對(duì)A549肺腺癌細(xì)胞的放射增益比分別為0.79、1.11、1.19，對(duì)H1299肺腺癌細(xì)胞的放射增益比分別為0.85、1.20、1.27。
　　H1299細(xì)胞在HGF刺激后，p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2高表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用ARQ197，隨著 ARQ197濃度

5、的增加，p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表達(dá)進(jìn)行性下降。細(xì)胞接受2Gy照射后，p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2高表達(dá)；同時(shí)應(yīng)用ARQ197，p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表達(dá)顯著下降，總的c-Met、Akt和Erk1/2蛋白的表達(dá)水平無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：通過(guò)平板克隆形成分析法，我們可以得出 ARQ197對(duì)人肺腺癌細(xì)胞有一定的放射增敏作用。通過(guò)蛋白印記檢測(cè)，我們進(jìn)一步得出 ARQ197