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文檔簡介
1、胰腺癌是一種進展較快,死亡率較高的惡性腫瘤,其5年生存率小于5%。而導致其預后較差的主要原因是缺乏有效的可用于胰腺癌早起診斷的腫瘤標記物和治療靶點。因此,探究關于胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學機制是非常必要。這些年以來,很多研究顯示,在不少腫瘤中 LITAF基因能夠對腫瘤產生明顯的抑制效果,但 LITAF基因在胰腺癌中的作用則少有報道。
本次研究的目的旨在探究LITAF基因在胰腺癌中的生物學功能,及其表達的調節(jié)機制。在研究中,首先
2、收集了用于體內實驗的50例胰腺癌病例的標本,這其中包括25例配對新鮮組織樣本并含有相應的石蠟包埋組織樣本,另外25例則僅有石蠟包埋的組織樣本。以及用于體外實驗的4株胰腺癌細胞株(分別為BxPC-3,AsPC-1,CFPAC-1和PANC-1)。我們利用亞硫酸氫鹽測序法(BSP)以及甲基化特異性PCR技術(MSP)對LITAF基因啟動子片段的甲基化狀態(tài)進行檢測。該啟動子片段位于LITAF基因轉錄起始位點附近的5’非轉錄區(qū)(Genbank
3、accession: NC018927 Region:11680019-11680258),包含240個堿基、16個CpG位點。此外,用免疫組織化學染色。MTT試驗,流式細胞儀等方法分別檢測了胰腺癌細胞中LITAF蛋白的表達,細胞增值,凋亡及細胞周期的水平。結果發(fā)現(xiàn)在25例新鮮的配對組織樣本中,腫瘤組織LITAF mRNA的表達顯著低于癌旁正常組織。在胰腺癌組織中,LITAF蛋白的表達呈現(xiàn)出高、低兩種不同的水平,LITAF蛋白低表達病例
4、的無病生存期顯著下降,但總體生存期沒有明顯的差異。在對LITAF基因啟動子進行甲基化狀態(tài)分析后發(fā)現(xiàn),LITAF基因的低表達與其啟動子的高甲基化狀態(tài)有關,且LITAF基因的表達可以被去甲基化藥物所調節(jié)并呈現(xiàn)劑量依賴。同時,在胰腺癌細胞株中對LITAF基因啟動子去甲基化處理后,抑制了胰腺癌細胞的增值,促使其發(fā)生凋亡及細胞周期阻滯。綜上,LITAF基因或許是一個潛在的抑癌基因,并有可能作為胰腺癌患者預后的指標,而該基因的表達受其啟動子異常高甲
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