CIDE-B基因啟動子甲基化及mRNA表達水平與超重肥胖的關系.pdf

1、目的：檢測超重肥胖者和正常對照者外周血CIDE-B基因啟動子序列甲基化水平及皮下和大網(wǎng)膜脂肪組織mRNA表達水平，探討CIDE-B基因啟動子區(qū)域甲基化程度及mRNA表達水平與超重肥胖的關系。
　　方法：納入患者均來自于醫(yī)院腹部手術患者，手術前測定身高、體重、腰圍、臀圍及基本的生化指標。排除孕婦、殘障或精神障礙者、繼發(fā)性肥胖者、惡性腫瘤患者及乙肝、艾滋病、結核等傳染性疾病患者。采用2007年中國成人肥胖診斷標準，將研究對象分為超重肥

2、胖組（BMI?24.0kg/m2）和正常組（18.5 kg/m2?BMI<24 kg/m2）。采用質(zhì)譜法檢測啟動子甲基化，研究對象共116例，其中超重肥胖組66例，正常組50例，均于手術前抽取清晨空腹外周靜脈血2ml，用EDTA-K2抗凝，經(jīng)3000rpm離心10min分離血漿和細胞后于-80攝氏度冰箱保存待測；采用熒光定量PCR檢測mRNA表達水平，納入研究對象106例，其中超重肥胖組60例，正常組46例，研究對象在全麻情況下施行手術

3、，打開腹膜分別取2g皮下和大網(wǎng)膜組織，并立即用無菌的生理鹽水進行沖洗，裝在2ml的凍存管內(nèi)，置液氮中保存。用IBM SPSS Statistics21.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，組間差異采用兩獨立樣本的t檢驗或Mann-Whitney U檢驗，計數(shù)資料采用?2檢驗，CpG位點甲基化水平對BMI的影響程度分析采用多重線性回歸，皮下和大網(wǎng)膜脂肪組織目的基因表達量差異采用配對t檢驗或Wilcoxon符號秩和檢驗，檢驗水準α=0.05。
　　結

4、果：
　　1、本次sequenom質(zhì)譜法共檢測出CIDE-B基因啟動子序列21個CpG位點存在甲基化。兩獨立樣本t檢驗結果顯示，正常組與超重肥胖組間該基因各CpG位點甲基化水平差異無統(tǒng)計學意義；甲基化水平最高的是 CpG4.5（0.65±0.06），最低的是 CpG15（0.04±0.05）；多重線性回歸結果顯示，超重肥胖組BMI受CIDE-B基因CpG14位點甲基化水平影響，腰臀比受性別和CpG30位點甲基化水平影響。
　

5、　2、皮下脂肪組織 CIDE-B基因 mRNA的相對表達量是大網(wǎng)膜脂肪組織的1.93倍（皮下脂肪組織△Ct=2.34±1.80，大網(wǎng)膜脂肪組織△Ct=1.40±1.04），配對t檢驗結果顯示，差異有統(tǒng)計學意義；皮下脂肪組織中，60例超重肥胖者CIDE-B基因mRNA的相對表達量是46例正常者的0.84倍（正常組△Ct=0.88±1.48，超重肥胖組△Ct=1.14±1.16），兩獨立樣本t檢驗結果顯示差異無統(tǒng)計學意義；大網(wǎng)膜脂肪組織中，

6、60例超重肥胖者 CIDE-B基因mRNA的相對表達量是46例正常者的1.72倍（正常組△Ct=2.22±1.55，超重肥胖組△Ct=1.44±0.99），兩獨立樣本 t檢驗結果顯示差異有統(tǒng)計學意義。
　　3、大網(wǎng)膜脂肪組織中，舒張壓大于80mmHg的研究對象該基因的相對表達量是舒張壓小于80mmHg的1.01倍，且差異有統(tǒng)計學意義；皮下脂肪組織中，TG含量高的研究對象目的基因相對表達量是TG含量低的1.20倍，差異有統(tǒng)計學意義；

7、高HDL目的基因相對表達量是低HDL的0.76倍，差異有統(tǒng)計學意義；高LDL目的基因相對表達量是低LDL的1.11倍，差異有統(tǒng)計學意義。
　　4、多重線性回歸結果顯示，CpG19位點甲基化水平對目的基因 mRNA在大網(wǎng)膜脂肪組織中表達的影響有統(tǒng)計學意義，皮下脂肪組織中，CpG2位點甲基化水平對目的基因 mRNA表達的影響有統(tǒng)計學意義。
　　結論：CIDE-B基因啟動子序列存在異常甲基化狀態(tài)，且甲基化程度越高，BMI和腰臀比越