齊墩果酸對(duì)腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)的成纖維樣滑膜細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：齊墩果酸對(duì)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）誘導(dǎo)的人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞（Human fibroblast-like synoviocytes,HFLS）炎癥因子表達(dá)的影響及其可能的分子機(jī)制，為齊墩果酸在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)并傳代人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法：四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT）檢測(cè)HFLS活性，western blot蛋白檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞p

2、38MAPK及NF-κB p65的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)白介素-6（Interleukin–6,IL-6）和白介素1β（Interleukin–1β,IL-1β）的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)HFLS上清液中IL-6和IL-1β的生成。
　　3、實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)研究目的將實(shí)驗(yàn)分為3部分：（1）檢測(cè)齊墩果酸對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下HFLS的影響，將細(xì)胞分為6組：對(duì)照組及不同濃度齊墩果酸組（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol

3、/L、80μmol/L）；（2）檢測(cè)齊墩果酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS炎癥因子表達(dá)的影響，分為5組：對(duì)照組，TNF-α組及TNF-α+不同濃度齊墩果酸組（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）；（3）檢測(cè)p38MAPK及NF-κB的蛋白表達(dá)變化，將細(xì)胞分為5組：對(duì)照組，TNF-α組，TNF-α+不同濃度齊墩果酸組（5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）；（4）檢測(cè)p38MAPK及NF-κB阻斷劑對(duì)HFLS上清

4、液中炎癥因子生成的影響，分為5組：對(duì)照組，TNF-α組，TNF-α+齊墩果酸（20μmol/L）組，TNF-α+p38MAPK阻斷劑組，TNF-α+NF-κB阻斷劑組。
　　結(jié)果：
　　1、5μmol/L-20μmol/L的齊墩果酸對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)的HFLS的活性無(wú)明顯影響（P>0.05）。當(dāng)濃度大于40μmol/L后，齊墩果酸明顯抑制細(xì)胞活性（P<0.05）。
　　2、與對(duì)照組比較，TNF-α明顯促進(jìn)IL-6及IL-1β的

5、mRNA表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、與TNF-α組比較，不同濃度齊墩果酸對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的IL-6及IL-1β的mRNA表達(dá)均有抑制作用，并呈濃度依賴性（P<0.05）。
　　4、與對(duì)照組比較，TNF-α能促進(jìn)p38MAPK的磷酸化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與TNF-α組比較，齊墩果酸能抑制TNF-α誘導(dǎo)的p38MAPK磷酸化（P<0.05），且呈濃度依賴性。
　　5、與對(duì)照組比較，

6、TNF-α能促進(jìn)NF-κB核蛋白的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與TNF-α組比較，齊墩果酸能抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB核蛋白的表達(dá)（P<0.05）。
　　6、加入p38MAPK阻斷劑SB203580和NF-κB抑制劑Bay11-7082后，與TNF-α組比較，IL-6及IL-1β的生成明顯減少（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、TNF-α能促進(jìn)HFLS細(xì)胞IL-6及IL-1β的表達(dá)和分泌，并促進(jìn)p