羅格列酮和腫瘤壞死因子-α對(duì)抵抗素的表達(dá)調(diào)控及其機(jī)制.pdf

1、第一部分羅格列酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠抵抗素基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用 目的:觀察羅格列酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠抵抗素基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，進(jìn)一步探討其可能的作用機(jī)制。 方法:采用小劑量鏈脲佐菌素尾靜脈注射加高脂高糖喂養(yǎng)的方法建立2型糖尿病模型，分正常組、糖尿病組和羅格列酮干預(yù)組，前兩者給予蒸餾水8ml·kg-1·d-1灌胃，后者則給予羅格列酮2mg·kg-1·d-1灌胃，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)各組大鼠的空腹血糖，胰島素，血清膽固醇及甘油三酯

2、，采用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組大鼠大網(wǎng)膜脂肪組織中抵抗素基因的表達(dá)。 結(jié)果:與糖尿病組相比，羅格列酮干預(yù)組大鼠空腹血糖及胰島素水平降低(P＜0.01)，胰島素敏感性指數(shù)升高(P＜0.01)，血清膽固醇水平降低(P＜0.01)；羅格列酮干預(yù)組大鼠大網(wǎng)膜脂肪組織中抵抗素基因表達(dá)較糖尿病組明顯降低(P＜0.01)，但仍高于正常組(P＜0.01)。 結(jié)論:羅格列酮能夠降低實(shí)驗(yàn)性2型糖尿病大鼠的空腹血糖及胰島素，有效改善胰島素

3、抵抗，降低血清膽固醇；降低2型糖尿病大鼠大網(wǎng)膜脂肪組織中抵抗素基因表達(dá)。 第二部分腫瘤壞死因子-a對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)的影響及機(jī)制 目的:觀察腫瘤壞死因子-a對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)的影響，探討其可能機(jī)制。 方法: 1、(1)3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)胞后，分別于培養(yǎng)瓶中加入濃度為0，1，10，100ng/mlTNFa的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h，測(cè)抵抗素的表達(dá)；(2)

4、于分化成熟的脂肪細(xì)胞加入濃度為100ng/mlTNFa的培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3，6，24h，測(cè)3，6，24h時(shí)的抵抗素mRNA的表達(dá)；(3)3T3-L1脂肪細(xì)胞分化成熟后，分為：對(duì)照組，不加任何干預(yù)劑；TNFa組，加入濃度為100ng/mlTNFa；Ro-31-8220組，加入濃度為5μmol/L蛋白激酶C的抑制劑馬來(lái)酰亞胺甲磺酸鹽(Ro-31-8220)和TNFa+Ro-31-8220組，用濃度為5μmol/LRo-31-8220預(yù)處理1

5、小時(shí)，再加入濃度為100ng/mlTNFa，以上各組培養(yǎng)24小時(shí)。 2、分別用RT-PCR的方法檢測(cè)各組3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素mRNA的表達(dá)，用Westernblotting檢測(cè)各組3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)。 結(jié)果: 1、濃度為1、10、100ng/mlTNFa組抵抗素mRNA的A值比分別為0.27±0.013、0.18±0.010和0.10±0.012，與空白對(duì)照組的A值比0.50±0.011相比較，

6、差異有顯著性(P＜0.01)；濃度為1、10、100ng/mlTNFa組抵抗素蛋白的A值分別為119929.3±9934.8、76178.2±1247.8和41538.5±1032.0與空白對(duì)照組的A值225396.8±10250.6相比，差異亦有顯著性(P＜0.01)。 2、在濃度為100ng/mlTNFa的條件下，分別干預(yù)3、6、24小時(shí)的A值比分別為0.30±0.029、0.20±0.027和0.12±0.021，與對(duì)照組

7、的A值比0.53±0.052相比較，差異有顯著性(P＜0.01)。 3、TNFa組、Ro-31-8220組和TNFa+Ro-31-8220組抵抗素mRNA的A值比分別為0.13±0.021、0.14±0.019和0.13±0.018，與對(duì)照組的A值比0.48±0.047相比較，差異有顯著性(P＜0.01)，而TNFa組、Ro-31-8220組和TNFa+Ro-31-8220組之間相比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)；TNFa組、R

8、o-31-8220組和TNFa+Ro-31-8220組抵抗素蛋白的A值分別為43412.2±2938.1、44160.0±4342.1和41504.5±5324.2與對(duì)照組抵抗素蛋白的A值165573.5±9865.2相比較，差異有顯著性(P＜0.01)，而TNFa組、Ro-31-8220組和TNFa+Ro-31-8220組之間相比較，無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論 腫瘤壞死因子a能抑制3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素的表

9、達(dá)，這種抑制作用隨抑制物濃度增大及抑制時(shí)間的延長(zhǎng)而加強(qiáng)；其機(jī)制可能部分是通過蛋白激酶C信號(hào)傳導(dǎo)途徑調(diào)控的。 第三部分蛋白激酶C傳導(dǎo)途徑對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)的影響 目的:觀察蛋白激酶C轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)的影響。 方法:3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟的脂肪細(xì)胞后，分別于培養(yǎng)瓶中加入濃度為50nmol/L的12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)和濃度為5μmol/L馬

10、來(lái)酰亞胺甲磺酸鹽(Ro-31-8220)，培養(yǎng)24h，用RT-PCR的方法檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素mRNA的表達(dá)，用Westernblotting檢測(cè)3T3-L1脂肪細(xì)胞抵抗素表達(dá)。 結(jié)果: 1、PMA組及Ro-31-8220組抵抗素mRNA的A值比分別為0.37±0.017、0.11±0.013，與對(duì)照組的A值比0.21±0.021相比較，差異有顯著性(P＜0.01)。 2、PMA組及Ro-31-8220