末端氨基酸殘基的去除對黑曲霉木聚糖酶XynⅢ熱穩(wěn)定性的影響.pdf

1、微生物木聚糖酶廣泛應(yīng)用于紙漿生物漂白、飼料添加劑、面團(tuán)改良、及功能性低聚木糖制造等。本實驗室篩選的黑曲霉A-25是一株木聚糖酶高產(chǎn)菌株,由它分泌的β-1,4-內(nèi)切木聚糖酶的最適溫度為48℃、最適pH為3.8,不利于在高溫高堿的生物工程環(huán)境下使用。
　　 通過生物信息學(xué)和相關(guān)軟件對本實驗室的來自黑曲霉A-25木聚糖酶的三維結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分子模擬后發(fā)現(xiàn),該酶分子的N-端由5個氨基酸組成的殘基和C-端2個氨基酸組成的殘基處于游離狀態(tài),并沒

2、有參與木聚糖酶分子二級結(jié)構(gòu)的形成。為了探究游離氨基酸對木聚糖酶熱穩(wěn)定性的影響,本實驗通過PCR技術(shù)得到分別去除兩端游離氨基酸的木聚糖酶突變基因,并在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá),對野生型原酶和穩(wěn)定性高的突變蛋白進(jìn)行了純化,對突變酶的性質(zhì)進(jìn)行研究。
　　 酶學(xué)性質(zhì)分析發(fā)現(xiàn),C-端去除兩個氨基酸的突變酶--XynⅢ-2aa,最適溫度為52℃,比野生型酶XynⅢ(48℃)提高了4℃,經(jīng)50℃40min,52℃20min熱處理后,殘余酶活