表面分子CD25的下調(diào)延長同種異體角膜植片存活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.通過建立同種異體大鼠的角膜移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討CD25-siRNA基因治療能否抑制角膜移植免疫排斥反應(yīng)，及其機(jī)制是否與調(diào)節(jié)Treg/Th1細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)。
　　2.通過建立同種異體小鼠的高危角膜移植實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討CD25單抗、雷帕霉素的效應(yīng)是否與DC細(xì)胞、Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)有關(guān)。
　　方法:
　　1.Wistar大鼠作為供體，SD大鼠作為受體，構(gòu)建大鼠的角膜移植模型。將術(shù)后大鼠隨機(jī)分為3組，分別

2、為移植對照組、無義siRNA轉(zhuǎn)染組和CD25-siRNA轉(zhuǎn)染組。術(shù)后1周后開始，每天對植片行臨床評分。于術(shù)后14天行HE染色檢測角膜組織病理情況，行免疫組化檢測IL-10、TGF-β、IFN-γ、IL-1β、TNF-α和Foxp3因子的表達(dá)。分別于術(shù)后3、7、14、21天行流式檢測術(shù)后大鼠外周血中CD4+T細(xì)胞的比例。
　　2.C57BL/6小鼠作為供體，Balb/c小鼠作為受體，受體右眼角膜縫線后2周行穿透性角膜移植手術(shù)，構(gòu)建小

3、鼠的高危角膜移植模型。將術(shù)后小鼠隨機(jī)分為4組，分別為移植對照組、CD25單抗組、雷帕霉素組和CD25單抗聯(lián)合雷帕霉素組。于術(shù)后12天行HE和DC細(xì)胞的免疫組化。術(shù)后第12天應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析各組小鼠引流淋巴結(jié)、脾臟中CD4+T，Treg細(xì)胞，DC細(xì)胞的比例；應(yīng)用qRT-PCR分析各組植片和引流淋巴結(jié)中細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-1β和TGF-β）的mRNA表達(dá)水平。術(shù)后4周內(nèi)每日觀察角膜植片的存活情況。
　　結(jié)果:

4、>　　1.在Wistar-SD大鼠低危角膜移植模型中，與移植對照組、無義CD25siRNA轉(zhuǎn)染組相比，CD25siRNA轉(zhuǎn)染組植片渾濁、水腫及新生血管化指標(biāo)的評分減低，角膜植片的存活時(shí)長顯著增加（p<0.05）。術(shù)后第14天免疫組化顯示，CD25-siRNA轉(zhuǎn)染組的IL-10、TGF-β的表達(dá)高于另外兩組； IFN-γ、TNF-α和IL-1β的表達(dá)低于另外兩組；而Foxp3的表達(dá)三組之間無顯著差異。術(shù)后3、7、14、21天，對照組外周血

5、CD4+T淋巴細(xì)胞亞群比例逐漸增加，而CD25-siRNA轉(zhuǎn)染組的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，CD4+ T細(xì)胞的比例都低于對照組（p<0.05）。
　　2.在C57BL/6—Balb/c小鼠高危穿透性角膜移植模型中，與對照組相比，干預(yù)組植片的存活時(shí)長顯著增加（p<0.05）。術(shù)后第12天，CD25單抗組、雷帕霉素組和CD25單抗聯(lián)合雷帕霉素組3組植片的炎癥減輕，DC細(xì)胞在植片的分布減少，引流淋巴結(jié)中DC細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞所占比例減少。雷帕霉素組

6、淋巴結(jié)的Treg細(xì)胞比例高于對照組，CD25單抗組低于對照組，而聯(lián)合干預(yù)組Treg細(xì)胞保持在對照組的一致水平。術(shù)后12天于對照組相比，3組干預(yù)組植片的IFN-γ、IL-2、IL-1βmRNA明顯降低，此外，CD25單抗組、CD25單抗聯(lián)合雷帕霉素組的TGF-βmRNA顯著升高。
　　結(jié)論:
　　1.下調(diào)表面分子CD25的表達(dá)能有效抑制角膜移植排斥反應(yīng)的發(fā)生，延長角膜植片的存活時(shí)間。
　　2.CD25的下調(diào)減輕排斥反應(yīng)的