神經(jīng)氨酸酶預(yù)處理供體骨髓細(xì)胞延長(zhǎng)大鼠同種異體皮存活的研究.pdf

1、背景與目的：對(duì)于大面積深度燒傷患者而言，自體皮源不足的問(wèn)題尤為突出，但移植排斥反應(yīng)與應(yīng)用免疫抑制劑的嚴(yán)重副作用之間的矛盾一直困擾著異基因皮膚移植的臨床應(yīng)用。所以，如何延長(zhǎng)異基因移植皮膚在燒傷創(chuàng)面的存活時(shí)間是燒傷早期創(chuàng)面處理研究的重要課題之一。肝臟位于胃腸道與腔靜脈系統(tǒng)之間，其獨(dú)特的解剖學(xué)位置和代謝內(nèi)環(huán)境決定其在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要的作用，而門(mén)靜脈穿刺操作復(fù)雜，又有許多并發(fā)癥發(fā)生的危險(xiǎn)，使其臨床應(yīng)用受到制約。 有研究表明，肝細(xì)胞表面

2、有無(wú)唾液酸糖蛋白的受體，而經(jīng)神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase，Neu)預(yù)處理的淋巴細(xì)胞或骨髓細(xì)胞(bonemarrowcells，BMCs)表面則富含無(wú)唾液酸糖蛋白。因此經(jīng)Neu預(yù)處理能增強(qiáng)淋巴細(xì)胞或BMCs對(duì)肝臟的親和性。本研究以大鼠為研究對(duì)象，觀察Neu預(yù)處理對(duì)BMCs經(jīng)外周靜脈注射后在受體內(nèi)的分布、造血集落及外周血嵌合體形成的影響，篩選出使dBMCs偏向性分于受體肝臟的Neu最適預(yù)處理濃度。并在此基礎(chǔ)上，探討Neu預(yù)處理供體

3、BMCs經(jīng)外周靜脈輸注對(duì)異體皮膚存活的影響，預(yù)期尋求一種創(chuàng)傷小、易于操作而又安全可靠的免疫耐受誘導(dǎo)方法。 方法： 1.以Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠作為BMCs的供體，以Wistar雌性大鼠作為受體，采用四種不同濃度(0，0.5，1.0，2.0U/ml)的Neu預(yù)處理SD雄性大鼠dBMCs，以99Tcm-SnCl2法標(biāo)記，經(jīng)Wistar雌性大鼠尾靜脈注射，觀察dBMCs在受體內(nèi)各主要組織器官的分布。

4、 2.實(shí)驗(yàn)對(duì)象及分組同上，在尾靜脈輸注15天后取受體Wistar大鼠全身各主要器官行病理組織學(xué)觀察造血集落的形成情況；從受體外周血提出全血DNA，PCR擴(kuò)增后凝膠電泳分析，檢測(cè)有無(wú)供體特異性的SRY的目的基因片斷。 3.在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，聯(lián)合短期應(yīng)用環(huán)孢素A(CyclosporinA，CsA)，用SD大鼠(♂)作為BMCs和異體皮的供體，Wistar大鼠(♀)作為受體，觀察異體皮的存活情況。以此分析使BMCs偏向性分布于受體肝

5、臟內(nèi)的最適預(yù)處理濃度能否誘導(dǎo)延長(zhǎng)異體皮的存活時(shí)間。 結(jié)果： 1.以不同濃度Neu預(yù)處理，dBMCs在受體內(nèi)各組織器官的分布形式類(lèi)似，依次為：肝＞腎＞肺＞脾＞股骨＞心＞胸腺，但1.0U/ml組肝臟、腎臟、脾臟內(nèi)的百分含量與對(duì)照組比較有顯著差別。 2.不同濃度Neu預(yù)處理的dBMCs于尾靜脈注射15天后，病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示，每組受體肝臟內(nèi)均有髓系細(xì)胞和/或紅系細(xì)胞組成的造血集落形成，每個(gè)高倍鏡下造血集落數(shù)量上實(shí)驗(yàn)

6、組與對(duì)照組之間無(wú)差別，形態(tài)上也類(lèi)似，而其它器官(脾、胸腺、肺、腎、心)內(nèi)未見(jiàn)造血集落形成。dBMCs輸注15天后，不同濃度預(yù)處理組部分受體內(nèi)可檢測(cè)到供體Y染色體特異性的SRY基因序列，而對(duì)照組沒(méi)有檢測(cè)到。 3.對(duì)照組大鼠于術(shù)后8～9d皮片全部變干、變硬。聯(lián)合短期應(yīng)用CsA后，dBMCs組和Neu-dBMCs組移植皮片的排斥反應(yīng)多表現(xiàn)為表皮液化、脫落，存活時(shí)間延長(zhǎng)。對(duì)照組、dBMCs組和Neu-dBMCs組異體皮片的MST((-x

7、)±s(-x))分別為(8.3±0.2)、(11.7±0.6)、(13.6±0.5)d。聯(lián)合短期應(yīng)用CsA，dBMCs組及Neu-dBMCs組異體皮片的MST均與對(duì)照組有非常顯著的差異(P＜0.01)；Neu-dBMCs組的同種異體皮片成活時(shí)間較dBMCs組又明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.適當(dāng)濃度的Neu預(yù)處理可增強(qiáng)經(jīng)外周靜脈輸注的dBMCs在受體肝臟內(nèi)的分布。 2.比較dBMCs在全身七個(gè)不同組織器官