MSCs聯(lián)合PRP對(duì)兔前交叉韌帶重建后腱骨愈合的影響.pdf

1、目的：探討在兔前交叉韌帶重建模型骨隧道內(nèi)局部應(yīng)用兔自體間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）復(fù)合富血小板血漿（PRP）對(duì)兔膝關(guān)節(jié)前交叉韌帶重建后早期腱-骨愈合的影響。
　　方法：24只健康的新西蘭大白兔隨機(jī)平均分配為4組，記為：M組、P組、MP組及C組。于M組及MP組皮下注射G-CSF1周后取其耳緣靜脈血，密度梯度離心法分離出兔MSCs，置于恒溫箱中培養(yǎng)傳代至第3代，光鏡觀察MSCs細(xì)胞形態(tài)后行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)及成骨定向分化鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞。對(duì)所

2、有兔建立兔ACL重建模型，造模前取P及MP組每只兔耳緣靜脈血各5ml，通過(guò)Landesberg兩次離心的方法獲取PRP，在M、P、MP及C組分別在肌腱骨道內(nèi)注入以生物蛋白膠為媒介的MSCs、PRP、MSCs復(fù)合PRP，C組僅注入生物蛋白膠。由各組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取2只制作組織切片，每只制作標(biāo)本切片5張，行masson三色染色，觀察組織形態(tài)及進(jìn)行組織學(xué)Burke評(píng)分。對(duì)組織學(xué)Burke評(píng)分采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)及Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。設(shè)定α=0

3、.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：細(xì)胞原代培養(yǎng)生長(zhǎng)迅速，細(xì)胞緊貼培養(yǎng)瓶底部，呈長(zhǎng)梭形、胞質(zhì)透亮。培養(yǎng)細(xì)胞傳至第3代可見(jiàn)明顯集落形成，形態(tài)均一，排列整齊，生長(zhǎng)旺盛。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果得出被檢測(cè)細(xì)胞表面對(duì)CD29、CD90有陽(yáng)性表達(dá)而對(duì)CD11b、CD34表達(dá)為陰性，且細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)后可分化為骨細(xì)胞，符合MSCs鑒定結(jié)果，可認(rèn)為所培養(yǎng)的細(xì)胞即為MSCs。M、P及MP組在術(shù)后第4周觀察可見(jiàn)，腱骨連接緊密,可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞長(zhǎng)入,在MP

4、組可見(jiàn)部分成熟的軟骨樣細(xì)胞散在地分布于腱骨界面。術(shù)后8周MP、P、M組均可見(jiàn)Sharpy樣纖維成分且MP組Sharpy樣纖維的含量較4周有增多的趨勢(shì)，其中MP組中成熟的軟骨樣細(xì)胞明顯多于其它兩組。術(shù)后12周， M、P、MP組可見(jiàn)大量Sharpy樣纖維形成， C組僅在第12周發(fā)現(xiàn)有Sharpy樣纖維切片1張。MP組含Sharpy樣纖維切片數(shù)量與其余3組相比P<0.05，組織學(xué)Burke評(píng)分與其余3組相比P<0.05。MSCs及PRP能促進(jìn)