探討炎癥因子對體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的影響.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)完整三叉神經(jīng)節(jié)組織，建立一種能夠易于控制的類似三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)環(huán)境過程的生物活性體系。探討腫瘤壞死因子（TNF-α）對其體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的三叉神經(jīng)細胞降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的影響及水平變化。
　　方法：18只 SD大鼠急性分離左右兩個三叉神經(jīng)節(jié)，完整獲取36個三叉神經(jīng)節(jié)后，取12個用4％多聚甲醛固定，余下24個行體外培養(yǎng)培養(yǎng)6天后，分為正常組12個和實驗組12個。正常組繼續(xù)換液，對實驗組的處理：將配制好一定濃度的

2、腫瘤壞死因子（TNF-α）加入 DMEM培養(yǎng)液中，與 SD大鼠三叉神經(jīng)節(jié)離體培養(yǎng)24 h。然后通過 HE染色觀察體外培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)組和新鮮未培養(yǎng)組的神經(jīng)元的細胞變化,再通過免疫組化技術(shù)和蛋白技術(shù)兩種方法，觀察加入 TNF-α前后CGRP的水平變化，分析TNF-α對體外培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)的影響。
　　結(jié)果：1.新鮮未培養(yǎng)組和常規(guī)培養(yǎng)組的 HE染色表明體外培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細胞未發(fā)生明顯的組織細胞水腫、變性、壞死和細胞凋亡等病理學(xué)改

3、變。2.蛋白印跡技術(shù)表明常規(guī)培養(yǎng)組和炎癥因子實驗組比，腫瘤壞死因子（TNF-α）使CGRP表達水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），進一步證明了炎癥因子參與三叉神經(jīng)痛的發(fā)病機制。3.免疫組化染色顯示離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)對照組和實驗組內(nèi)都有 CGRP免疫反應(yīng)陽性細胞表達,對照組圖表達量相對較低,實驗組CGRP陽性反應(yīng)細胞數(shù)表達水平顯著增高，CGRP陽性細胞出現(xiàn)棕褐色,胞體染色深淺不一,部分細胞中心部位著色淺,周圍胞漿點狀著色較深。4

4、.對 CGRP的免疫組化切片圖像進一步統(tǒng)計學(xué)分析,結(jié)果顯示炎癥因子實驗組 CGRP陽性反應(yīng)細胞數(shù)除平均面積外，平均光密度、平均積分光密度、平均灰度值顯著高于對照組(P<0.01)
　　結(jié)論：炎性因子TNF-α可顯著使離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元CGRP表達水平上升。從細胞形態(tài)分析，離體培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)方法可行，并且能夠易于控制三叉神經(jīng)節(jié)組織生存的內(nèi)環(huán)境，對于形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)研究易于實施，是一種三叉神經(jīng)功能活動發(fā)生機制和藥物開發(fā)研究