人甲型流感病毒H1N1通過新的通路感染無經(jīng)典的唾液酸α2,6和唾液酸α2,3受體的心肌細胞.pdf

1、背景和目的：人類呼吸道被認為是甲型人流感病毒H1N1感染的主要靶器官，然而，臨床上也有的H1N1感染患者發(fā)生了心血管系統(tǒng)并發(fā)癥的，而且在他們的心臟組織中檢測到了H1N1病毒的基因序列，而心肌細胞沒有流感病毒特異性受體。我們由此提出疑問：是不是心肌細胞也是H1N1感染的靶細胞？在缺乏流感病毒經(jīng)典的特異性受體（唾液酸a2,6半乳糖和唾液酸a2,3半乳糖）的情況下是否還有新的感染通路？本研究主要研究了心肌細胞是否能被H1N1感染。我們在這個研

2、究里的新發(fā)現(xiàn)揭示了H1N1能通過非經(jīng)典通路感染人、豬、兔子、鴿子和雞等多種不同物種的心肌細胞。
　　材料與方法：
　　1.活病毒H1N1
　　人甲型流感病毒H1N1(A/Nanchang/8002/2009)由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院國際感染與免疫研究所感染部的 David kelvin博士提供，病毒原液濃度滴定至1X107.2 TCID50/ml,與世界衛(wèi)生組織的指南一致。
　　2.研究對象
　　豬、鴿子、兔子和雞

3、的心肌組織和一株購自上海酶阿查生物控股有限公司的人心肌細胞系HCM(中科院細胞庫供應(yīng))。
　　3.凝集素染色（Lectin staining）
　　為了檢測中性多聚甲醛固定石蠟包埋的心肌組織切片以及一株人的心肌細胞系HCM的人流感病毒及禽流感病毒特異性受體的表達情況。
　　4.甲型流感病毒感染體外培養(yǎng)的新鮮的心臟組織（Influenza virus infection in ex-Vivo Culture fresh

4、heart tissues）
　　用活的甲型流感病毒H1N1感染體外培養(yǎng)的新鮮離體的心臟組織，檢測病毒的感染情況。
　　5.免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry,IHC）
　　用抗甲型流感病毒核蛋白NP的抗體檢測豬、鴿子、兔子和雞的心肌組織的感染情況。
　　6.甲型流感病毒感染細胞系（ Influenza virus infection of cell line）
　　為了驗證流感病毒能否

5、直接感染人心肌細胞，用活的甲型流感病毒感染 HCM細胞（人心肌細胞的一株細胞系），檢測病毒的感染情況。
　　7.免疫細胞化學(xué)（Immunocytochemistry，ICC）用抗甲型流感病毒核蛋白（anti-NP）的抗體檢測心肌細胞系的感染情況。
　　結(jié)果：
　　1.凝集素染色（Lectin staining）MAAI、MAAII和SNA在雞、豬、鴿子、兔子的心肌細胞以及人的心肌細胞系中的染色均呈陰性。
　　2.

6、甲型流感病毒感染體外培養(yǎng)的新鮮的心臟組織（Influenza A virus infection in ex-vivo culture fresh heart tissues）離體培養(yǎng)的新鮮的雞、豬、鴿子、兔子的心臟組織都可以被人流感病毒H1N1感染。陽性信號分布與植物凝集素染色檢測到的受體分布不一致，無流感病毒特異性受體的心肌細胞也都被病毒感染了。
　　3.甲型流感病毒感染細胞及免疫細胞化學(xué)(Immunocytochemistr