20601.應(yīng)用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定α(2,3)唾液酸氨基乳糖模擬肽

1、碩士學(xué)位論文題目應(yīng)用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定應(yīng)用噬菌體展示肽庫篩選和鑒定α(23)唾液酸氨基唾液酸氨基乳糖模擬肽乳糖模擬肽英文題目英文題目ScreeningIdentificationofa3’–SialyllactosamineGlycomimeticPeptidefromaPhageDisplayPeptideLibrary姓名馬志奎學(xué)號(hào)10920017所在學(xué)院醫(yī)學(xué)院導(dǎo)師姓名MelittaSchachner專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)入

2、學(xué)日期2009年9月答辯日期2012年5月2009級汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文馬志奎I中文摘要目的α(23)唾液酸多糖在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，參與調(diào)節(jié)諸如細(xì)胞遷移，軸突生長和收縮，突觸的形成和穩(wěn)定以及突觸的功能等過程。其中3’–SLN存在于眾多α(23)唾液酸多糖末端，是多糖發(fā)揮作用的關(guān)鍵位點(diǎn)，同時(shí)也可能成為神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療靶點(diǎn)，但由于3’–SLN在神經(jīng)系統(tǒng)中的研究和報(bào)道較少，3’–SLN的提純和合成成本高昂，不利于進(jìn)一步的

3、研究和應(yīng)用，因此，本課題旨在應(yīng)用朝鮮槐凝集素MAA對3’–SLN糖的特異識(shí)別作用和噬菌體多肽展示技術(shù)篩選出3’–SLN的糖模擬肽，在結(jié)構(gòu)和功能上替代3’–SLN，以利于進(jìn)一步研究3’–SLN的功能和新的治療藥物及靶點(diǎn)。方法1.噬菌體展示肽庫淘選根據(jù)肽庫說明書，進(jìn)行四輪淘選，第一輪主要過程：(1)靶分子包被：100μgml朝鮮槐凝集素MAA溶于pH8.6的NaHCO3溶液，包被于96孔板中，4℃過夜。(2)噬菌體結(jié)合及洗脫：倒掉包被液并將

4、板孔拍甩干凈，加滿封阻液，4℃作用2h。0.1%TBST緩沖液洗6次，去除封阻液，加入100μl，0.1%TBST緩沖液稀釋的41010噬菌體（即10μl原始文庫），室溫孵育60min，去除孵育液，0.1%TBST緩沖液洗板10次。加入100μlTBS稀釋的1mM的3’–SL溶液，室溫?fù)u動(dòng)60min，洗脫液轉(zhuǎn)入微量離心管，測定滴度。(3)噬菌體擴(kuò)增：將ER2738單克隆菌過夜培養(yǎng)物1:100稀釋于20mlLB培養(yǎng)液中，加入上述洗脫物，3