尿激酶的親和層析分離研究.pdf

1、尿激酶(Urokinase)是體內(nèi)纖溶酶原激活劑.自從在尿液中發(fā)現(xiàn)尿激酶以來,人們對它的研究也日益深入和全面.尿激酶參與纖溶過程,因而常用作治療腦血栓、急性心肌梗塞和靜脈栓塞等疾病.尿激酶是一種糖蛋白,屬絲氨酸蛋白酶類,等電點在8.4~9.7之間.尿激酶的活性檢測方法主要有直接法與間接法,采用間接法較為快捷,如熒光分光光度法和可見光分光光度法是使用較廣泛的測定方法.高純度的藥用尿激酶價格昂貴.通常是從成年健康男性尿液中提取,制得粗酶后早

2、期采用沉淀和傳統(tǒng)層析相結(jié)合的多步分離法,后來發(fā)展用親和層析純化尿激酶.該文采用Sepharose 4B為基質(zhì),對氨基苯甲脒(p-aminobenzamidine,p-ABZ)和肌酸為親和配基,制備親和層析柱分離尿激酶.在前人的研究工作基礎(chǔ)上,該文選擇對氨基苯甲脒層析柱在最優(yōu)的條件下分離尿激酶:合成配基密度48μmol·g<'-1>的親和載體,最大吸附量達2.17×10<'5>IU·g<'-1>載體以上;選擇pH7.5含0.5mol·L<

3、'-1>NaCl的0.05mol·L<'-1> Na<,2>HPO<,4>~NaH<,2>PO<,4>緩沖液為吸附條件,選擇pH4.0含0.5mol·L<'-1> NaCl的0.1mol·L<'-1>NaAc~HAc緩沖液洗脫條件;將尿激酶粗酶純化50.2倍,活性回收率為79﹪.首次將肌酸應(yīng)用于分離尿激酶,并取得較好的效果,合成配基為53μmol·g<'-1>的親和載體,最大吸附量為1.28×10<'5>IU·g<'-1>載體;選擇pH

4、4.5含0.5mol·L<'-1>NaAc,0.1mol·L<'-1> AlCl<,3>的0.1mol·L<'-1>NaAc~HAc緩沖液為吸附條件,選擇pH7.0含0.5mol·L<'-1>NaCl的0.05mol·L<'-1>Na<,2>HPO<,4>~NaH<,2>PO<,4>緩沖液為最終洗脫條件;將尿激酶粗酶純化63.7倍,活性回收率為81﹪.將兩種親和層析柱進行比較,發(fā)現(xiàn)Sepharose 4B~6-氨基己酰~對氨基苯甲脒吸附