層析分離純化家兔血清PON1條件優(yōu)化研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的: Paraoxonase(PON1)是一個(gè)鈣離子依賴的酯酶，它可以水解包括有機(jī)磷類，芳香酯類在內(nèi)的多種化合物。在本研究中，通過對(duì)傳統(tǒng)血清PON1提純中的離子交換步驟進(jìn)行條件優(yōu)化，尋找PON1提純中最佳離子交換層析PH值。 方法: 使用Cibacron Blue F3GA瓊脂糖的假親和層析得到初步分離富含PON1的Cibacron流分，選定DEAE Sepharose Fast Flow為離子交換層析介質(zhì)，

2、通過AKTApurifier全自動(dòng)層析儀，在PH值分別為7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5條件下對(duì)Cibacron流分進(jìn)行離子交換層析。通過結(jié)合AKTA purifier記錄的層析圖譜，含PON1活性成分的SDS-PAGE凝膠電泳分析層析結(jié)果及PON1酶活性監(jiān)測(cè)，綜合分析得到優(yōu)化的PH值。 結(jié)果: 1、AKTA purifier記錄的層析圖譜顯示，以DEAE Sepharose Fast Flow為介質(zhì)的陰離

3、子交換層析，在分離含有PON1的Cibacron Blue流分中，較高的PH值有利于蛋白質(zhì)的分離。 2、表明隨PH值增加，PON1與雜質(zhì)蛋白質(zhì)逐漸分離，PON1濃度相對(duì)蓄積，PH值為9.0及9.5條件下沒有額外雜質(zhì)蛋白質(zhì)由PON1活性峰分離。 3、PH值為9.0和9.5條件下得到高純度的PON1，達(dá)到經(jīng)典方案中的純化效果。 結(jié)論: PON1純化過程中，在PH值>=9.0條件下，以DEAE Sepharos

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