從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑探討益氣除痰方對(duì)肺癌未折疊蛋白反應(yīng)相關(guān)蛋白ATF6、XBP1、CNX的影響.pdf

1、背景：惡性腫瘤已成為威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的報(bào)告，肺癌的發(fā)病及死亡是惡性腫瘤的第一位，且仍在不斷上升，因此肺癌的防治成為全世界廣泛關(guān)注的問(wèn)題。目前針對(duì)肺癌的治療方法主要包括手術(shù)、放療、化療、分子靶向治療及生物治療等，但存在副作用大，易耐藥，療效不理想等問(wèn)題。中醫(yī)藥作為我國(guó)傳統(tǒng)且獨(dú)有的方法，在防治肺癌上有獨(dú)特的效果。益氣除痰方已經(jīng)過(guò)前期研究及長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐證明，能有效地抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)及抑制肺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。

2、>　　目的：本研究通過(guò)應(yīng)用益氣除痰方( Yiqi Chutan formula，YQCTF)干預(yù)，以人類(lèi)肺癌細(xì)胞A549為靶細(xì)胞，結(jié)合BALB/c裸小鼠實(shí)驗(yàn)，測(cè)量并計(jì)算肺癌A549裸鼠移植瘤體積、瘤重、抑瘤率，檢測(cè)移植瘤激活轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor6，ATF6）、調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子X(jué)盒結(jié)合蛋白1（X-box binding protein1，XBP1）、鈣聯(lián)蛋白（calnexin， CNX）的

3、表達(dá)情況，從調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑的角度研究其抗癌的具體機(jī)制。
　　方法：在BALB/c裸鼠背側(cè)皮下接種處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞懸液（1×107/mL），0.2mL/只。隨機(jī)分為模型組（生理鹽水0.2mL）、順鉑注射液組（0.002g·kg-1）、益氣除痰方低劑量組（3.0 g·kg-1）、益氣除痰方高劑量組（6.0 g·kg-1）、聯(lián)合用藥組（6.0 g·kg-1/0.002g·kg-1），每組8只。接種第8天，給予中藥灌胃，每

4、天1次，1次0.2mL，連用14天。第17天，順鉑注射液組及聯(lián)合用藥組給予順鉑注射液腹腔注射，每天1次，1次0.2mL，連用5天。在第22天，麻醉后處死裸鼠，稱(chēng)取瘤重，測(cè)量瘤體大小。采用免疫組織化學(xué)法、免疫印跡法（Western blot）及實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ quantitative real-time PCR， qRT-PCR）法檢測(cè)各組移植瘤組織ATF6、XBP1及CNX的表達(dá)。
　　結(jié)果：與模型組比較，除益氣

5、除痰方低劑量組外，各組移植瘤體積、瘤重、ATF6、XBP1、CNX mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)及平均吸光度均明顯降低（P＜0.01）。聯(lián)合用藥組瘤重及瘤體積低于順鉑注射液組（P＜0.05，P＜0.01）。聯(lián)合用藥組ATF6、XBP1及CNX的平均吸光度較順鉑注射液組降低（P＜0.05，P＜0.01）。聯(lián)合用藥組 ATF6、XBP1、CNX蛋白及mRNA的表達(dá)低于順鉑注射液組（P＜0.01）。
　　結(jié)論：益氣除痰方能夠抑制肺癌A549裸