哺乳期添加不同劑量DHA對新生SD大鼠生長發(fā)育、脂質(zhì)代謝的影響.pdf

1、目的:
　　二十二碳六烯酸（ DHA）是長鏈多不飽和脂肪酸polyunsaturated fatty acid（PUFAs）的主要成員之一。其分布主要集中在大腦的皮層、海馬、灰質(zhì)及視網(wǎng)膜等。在早期大腦神經(jīng)、視網(wǎng)膜的發(fā)育與功能中扮演著重要的角色。ω-3脂肪酸成分主要為二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。哺乳期喂養(yǎng)富含ω-3脂肪酸的母乳或強(qiáng)化嬰兒配方奶有利于嬰兒的神經(jīng)認(rèn)知的功能和視力的發(fā)育。目前越來越多報(bào)道指出，大腦中D

2、HA的快速積累主要發(fā)生在胎兒后期及生后第一年。DHA對于胎兒及嬰兒的大腦的發(fā)育和神經(jīng)功能發(fā)育至關(guān)重要。有研究報(bào)告指出，孕期飲食中富于ω-3脂肪酸能增加孕期體重、延長懷孕周期，從而減少早產(chǎn)和低出生體重兒的發(fā)生率。在早產(chǎn)分娩中，胎兒的體重和身長予胎盤中DHA的濃度有一定相關(guān)性，DHA的濃度影響著胎兒的生長模式。同時(shí)，在心血管專業(yè)，對DHA作用的研究也越來越受到關(guān)注。這些脂肪酸在機(jī)體中參與了多樣化的生理、生化等過程。其中包括細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、抗炎、

3、類二十烷酸代謝、基因轉(zhuǎn)錄作用等關(guān)系密切，具有改善神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等作用，同時(shí)降低心率及血壓、改善內(nèi)皮細(xì)胞的功能，降低血小板的聚集等功能。
　　方法:
　　1．給藥方式：生后48小時(shí)內(nèi)開始灌胃，每天9:00-12:00進(jìn)行，灌胃量為每次0.01ml/g，每天1次，共21天。
　　2.分組
　　2.1實(shí)驗(yàn)組：予DHA灌胃，按干預(yù)劑量不同分為高劑量組（600mg/kg）、中劑量組（300mg/kg）、低劑量組（100mg/

4、kg），每組各32只新生大鼠。
　　2.2對照組：予等量生理鹽水灌胃（NaCl組）。
　　3．觀察指標(biāo)
　　3.1于生后第1天、7天、14天、21天分別稱量體重。
　　3.2于6周、8周分別經(jīng)心臟采血，行血脂四項(xiàng)檢測。血脂四項(xiàng)分別為：高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三脂、膽固醇的含量指標(biāo)檢查（血脂4項(xiàng)檢測由廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心有限公司完成）。
　　3.3每組16只SD大鼠分別行心臟灌注，觀察心臟

5、、肝臟等臟器的大體改變；取心臟、肝臟組織標(biāo)本行油紅0染色。
　　3.4用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測試6周齡、8周齡SD大鼠的學(xué)習(xí)及記憶能力的水平；
　　3.5用蛋白印跡分析檢測6周齡大鼠海馬(CA1）區(qū)BDNF/AKT/mTOR的表達(dá)；
　　4．統(tǒng)計(jì)分析：所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，部分?jǐn)?shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)服從整體性檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)時(shí)使用LSD-t檢驗(yàn)

6、，若數(shù)據(jù)不符合則可行糾正的Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.采用新型灌胃器選取141只新生SD大鼠，出生體重平均為7.37±0.063g，128只新生鼠存活，動物存活率90.78％，順利完成實(shí)驗(yàn)。
　　2.21天SD大鼠的體重比較，低劑量組最高，高劑量組最低，低劑量組體重與各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ P<0.05）；高劑量組體重與各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。血脂分析比較：6周齡SD大鼠高密度

7、脂蛋白含量各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；兩兩比較，中劑量組高于其他各組（P<0.05），低劑量組高于高劑量組（P<0.05）。8周齡SD大鼠甘油三脂含量低劑量組低于對照組（P<0.05）。予以高劑量DHA干預(yù)的SD大鼠，有5只出現(xiàn)心臟、大血管壁的脂肪組織堆積，發(fā)生率為15.62%；
　　3.6周齡SD大鼠逃避潛伏期第三、四天比較，不同劑量組與對照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；空間探索實(shí)驗(yàn):路程百分比、穿越平臺的次數(shù)，高劑量組與對照

8、組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；8周齡SD大鼠逃避潛伏期第二天中劑量組與高劑量組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）、第三天對照組與高劑量比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；路程百分比中劑量組與低劑量組、高劑量組與低劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；穿越平臺的次數(shù)中劑量組與對照組、中劑量組與低劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.6周齡新生大鼠海馬CA1區(qū)蛋白表達(dá)的結(jié)果，BDNF蛋白水平比較，對照組與中劑量組比較P<0.05,mTOR蛋白水平的比較對照組與

9、中劑量組比較P<0.05;
　　結(jié)論:
　　1.新型灌胃器對新生大鼠的口腔、食管黏膜的損傷小，給藥依從性更優(yōu)、給藥時(shí)間更快速，新生大鼠存活率高，適合用于對大批量的新生大鼠進(jìn)行長期、有效的灌胃，有利于順利完成實(shí)驗(yàn)過程，為通過新生大鼠進(jìn)行藥物、營養(yǎng)的相關(guān)研究提供了建制新生大鼠動物模型的良好的方法與依據(jù)。
　　2. SD大鼠哺乳期補(bǔ)充適宜劑量DHA，可能會促進(jìn)新生鼠體重增長及改善血液內(nèi)脂肪酸代謝的水平；予以高劑量DHA喂養(yǎng)，