miR-185對黑色素瘤的抑制作用和輻射增敏作用研究.pdf

1、黑色素瘤是發(fā)生率、死亡率增長速度最快的皮膚病癌癥，一直以來都受到人們的廣泛關(guān)注。放療作為目前臨床上最常用的抗癌常規(guī)治療手段之一，是治療晚期轉(zhuǎn)移型黑色瘤的主要方法。但是，研究發(fā)現(xiàn)黑色素瘤細(xì)胞普遍對放療具有一定程度的耐受性，這使得常規(guī)放療療效受限，而通過增大放療劑量提高療效時又會帶來較大的副作用。目前，臨床上開發(fā)了一系列放療增敏劑用以提高放療的治療效果，主要包括化學(xué)類、中草藥類藥物，然而這些放療增敏劑均存在一定的弊端。因此，尋求高效、低毒的

2、放療增敏劑對于臨床黑色素瘤的放射治療意義重大。
　　microRNA（miRNA）是一類長度約為22個核苷酸的小RNA分子，通過與靶基因mRNA的3'-UTR區(qū)結(jié)合而引起其降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平發(fā)揮調(diào)控功能。miRNA不僅可以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、周期和凋亡等細(xì)胞進程，而且參與調(diào)控細(xì)胞的輻射應(yīng)答通路，影響細(xì)胞對射線的敏感性。多項研究證實。miR-185通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的周期阻滯、促進細(xì)胞的凋亡以及改變細(xì)胞基因組表觀遺傳等方式在

3、多種腫瘤中發(fā)揮抑瘤因子的功能。另一方面，我們的前期研究發(fā)現(xiàn)X射線輻照后的腎癌組織中miR-185的表達水平發(fā)生顯著下調(diào)，在體外和體內(nèi)水平miR-185均能顯著增強腎癌細(xì)胞的輻射敏感性；此外，miR-185還能降低胃癌細(xì)胞對化療藥物的耐受性。這些研究表明miR-185在調(diào)控腫瘤細(xì)胞對放療和化療的應(yīng)激響應(yīng)進程中發(fā)揮著重要的作用，能夠影響腫瘤細(xì)胞對輻射及對化療藥物的敏感性。然而，miR-185是否在黑色素瘤中同樣能夠發(fā)揮腫瘤抑制因子的功能以及

4、是否能夠增強黑色素瘤細(xì)胞的輻射敏感性仍不清楚。
　　為了探究miR-185對黑色素瘤發(fā)生和發(fā)展的影響，我們通過轉(zhuǎn)染的方法在小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16中過表達miR-185，并利用細(xì)胞生長曲線、劃痕及克隆形成實驗檢測miR-185對B16細(xì)胞增殖、遷移和克隆能力的影響，結(jié)果顯示miR-185能夠顯著地抑制細(xì)胞增殖、降低克隆形成和削弱細(xì)胞遷移。此外，我們將 B16細(xì)胞接種到 C57小鼠皮下成瘤，構(gòu)建了同種移植瘤模型，利用 PEI載體直接

5、在瘤體內(nèi)轉(zhuǎn)染miR-185，發(fā)現(xiàn)外源性過表達miR-185能顯著抑制瘤體生長，而瘤體組織Ki-67及PCNA免疫組化結(jié)果也表明過表達miR-185顯著降低了瘤體內(nèi)增殖期細(xì)胞的比率。
　　在明確了miR-185的腫瘤抑制功能后，我們繼續(xù)深入探索了miR-185對黑色素瘤細(xì)胞輻射敏感性的影響。我們發(fā)現(xiàn)4Gy的X射線能顯著降低B16細(xì)胞的增殖和遷移能力。更為重要的是與對照組相比，輻照對過表達 miR-185的B16細(xì)胞具有更好的殺傷效果

6、，過表達miR-185能顯著增強輻照導(dǎo)致的細(xì)胞增殖抑制和遷移抑制以及促凋亡水平。小鼠移植瘤實驗同樣表明miR-185能增強X射線輻照對瘤體生長的抑制效果，使得瘤細(xì)胞凋亡水平明顯增加。
　　綜上所述，我們的研究首次證實了無論在體外還是體內(nèi)水平miR-185都能夠發(fā)揮抑制黑色素瘤生長的作用，是一個強有力的抑癌因子；并且miR-185還能夠增強黑色素細(xì)胞對電離輻射的敏感性，是一個有效的放療增敏分子。我們的研究為miR-185的抑癌及輻射