熱療對(duì)黑色素瘤的治療作用及免疫反應(yīng)機(jī)制的初探.pdf

1、目的：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，探討1次加熱與2次加熱不同時(shí)間間隔，對(duì)小鼠黑色素瘤的殺傷作用；結(jié)合體外實(shí)驗(yàn)和在體實(shí)驗(yàn)，初步探討熱療對(duì)腫瘤免疫反應(yīng)的激發(fā)作用；研究腫瘤熱療較為理想的熱療劑量及條件，為熱療在腫瘤治療中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：在恒溫水浴中，將黑色素瘤B16細(xì)胞進(jìn)行43℃、48℃和55℃加熱。持續(xù)時(shí)間分別為30分鐘、10分鐘、5分鐘，進(jìn)行1次及間隔24、48、72小時(shí)的2次加熱，MTT法檢測(cè)熱對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的殺傷作用。將B16細(xì)

2、胞接種于C57BL/6小鼠右側(cè)肋脅部的皮下，建立小鼠皮下腫瘤模型，將64只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、43℃組、48℃組及55℃組四個(gè)大組，每大組又分為四個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只，4個(gè)亞組分別在不同的時(shí)間點(diǎn)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)情況，另4亞組的小鼠于熱療后第10天，眼球取血，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群的變化情況。并取腫瘤組織做病理切片，光鏡下觀察腫瘤形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，1次加熱組、2次加熱組與未加熱組

3、比較，以及48℃、55℃2次加熱組與1次加熱組比較，細(xì)胞生存率均明顯降低(P＜0.01)；48℃和55℃不同間隔時(shí)間2次加熱，對(duì)細(xì)胞生存率的影響差異無(wú)顯著性意義(P＞0.05)；43℃熱療，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)呈現(xiàn)減慢的趨勢(shì)，與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性意義(P＞0.05)。48℃組、55℃組腫瘤體積與對(duì)照組及43℃組相比明顯降低(P＜0.01)。43℃組、48℃組和55℃組CD4的表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組，CD8的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，CD4/C

4、D8比值均明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)；48℃組、55℃組CD4的表達(dá)量均明顯低于43℃組，CD8的表達(dá)量均明顯高于43℃組，CD4/CD8比值均明顯低于43℃組(P＜0.01)。 結(jié)論：48℃和55℃持續(xù)一定時(shí)間的熱療，能不同程度的殺死黑色素瘤細(xì)胞；2次熱療對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的殺傷作用優(yōu)于1次熱療。55℃5分鐘、48℃10分鐘的單純熱療，對(duì)小鼠黑色素瘤表現(xiàn)出較好的殺傷抑制作用。48℃組和55℃熱療，小鼠的腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制，腫