越橘花青素對(duì)人鞏膜成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP-2、Collagen I蛋白的影響.pdf

1、目的：
　　探討越橘花青素對(duì)人胚胎鞏膜成纖維細(xì)胞(Human fetal scleral fibroblast。HFSF)表達(dá)MMP-2、Collagen I蛋白的影響。
　　方法：
　　對(duì)HFSF細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，在倒置相差顯微鏡下觀(guān)察其細(xì)胞生物學(xué)特性；分別用0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mg/mL越橘花青素作用于HFSF細(xì)胞達(dá)6h、8h、12h、24h、48h，MTT法檢測(cè)越橘花

2、青素對(duì)HFSF細(xì)胞增殖的影響；用濃度為0,10-1mg/mL的越橘花青素作用于HFSF細(xì)胞達(dá)12h，流式細(xì)胞儀檢測(cè)越橘花青素對(duì)HFSF細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響；實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)越橘花青素對(duì)HFSF細(xì)胞表達(dá)MMP2、COL1A1、COL1A2基因的影響；免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)越橘花青素對(duì)HFSF細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrix metalloproteinase2。MMP-2)

3、、I型膠原蛋白(Collagen I)的影響；免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)TGF-β2對(duì)HFSF細(xì)胞表達(dá)I型膠原蛋白(Collagen I)的影響。
　　結(jié)果：
　　體外培養(yǎng)的成熟人胚胎鞏膜成纖維細(xì)胞多呈梭形，束狀或旋渦狀排列；MTT結(jié)果顯示越橘花青素促進(jìn)HFSF細(xì)胞生長(zhǎng)，在濃度10-1mg/mL、培養(yǎng)12h時(shí)細(xì)胞的增殖率最高；流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示越橘花青素的作用增加了G2期的HFSF細(xì)胞，且對(duì)HFSF細(xì)胞凋亡

4、沒(méi)有影響；qRT-PCR檢測(cè)的結(jié)果顯示越橘花青素作用HFSF細(xì)胞后，下調(diào)其MMP2基因的表達(dá)量，而細(xì)胞COL1A1、COL1A2基因表達(dá)量的改變沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western Blot檢測(cè)的結(jié)果顯示越橘花青素作用HFSF細(xì)胞后，下調(diào)其MMP-2蛋白的表達(dá)，而細(xì)胞Collagen I蛋白的表達(dá)未檢測(cè)出；使用TGF-β2作用HFSF細(xì)胞后，Western Blot法能夠檢測(cè)到細(xì)胞Collagen I蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論：