SB203580對(duì)體外培養(yǎng)人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、近視的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，且目前全球范圍內(nèi)并沒有發(fā)現(xiàn)針對(duì)近視有效的治療方式及干預(yù)措施。但隨著國內(nèi)外學(xué)者對(duì)近視研究的進(jìn)一步加深，發(fā)現(xiàn)多種生長因子、神經(jīng)遞質(zhì)等通過介導(dǎo)某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與近視形成及發(fā)展。異常的視覺信號(hào)刺激視網(wǎng)膜，引起相應(yīng)的信號(hào)因子等表達(dá)發(fā)生改變，并將信號(hào)傳導(dǎo)至脈絡(luò)膜及鞏膜，最終導(dǎo)致鞏膜重塑、眼軸延長、屈光度改變以致近視形成。鞏膜組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrixmetalloproteinases-2，MMP-2）和基

2、質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2（tissueinhibitorofmetalloproeinases-2，TIMP-2）比例失調(diào)，使鞏膜細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）減少流失，尤其是Ⅰ型膠原的減少，導(dǎo)致鞏膜變薄。多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被證明與鞏膜重塑及近視形成密切相關(guān)。P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路屬于MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路家族，在豚鼠鞏膜組織及體外培養(yǎng)的人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞（Humanfetalscleralfibrobl

3、asts，HFSFs）中均檢測到其表達(dá)，且在豚鼠實(shí)驗(yàn)性近視眼鞏膜組織中表達(dá)增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)HFSFs，并使用P38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑SB203580對(duì)細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，擬探討SB203580對(duì)HFSFs的影響以及可能與近視發(fā)生機(jī)制的關(guān)系。
　　目的：
　　觀察不同濃度SB203580對(duì)體外培養(yǎng)HFSFs細(xì)胞增殖能力、MMP-2、TIMP-2和Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響，以及Ⅰ型膠原蛋白合成的分布及表達(dá)量的變化。

4、探討SB203580對(duì)HFSFs細(xì)胞的影響，以及SB203580可能對(duì)近視發(fā)生發(fā)展過程產(chǎn)生的影響及作用機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)HFSFs，選取5-7代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有細(xì)胞分為兩組，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組HFSFs接受不同濃度SB203580刺激，分別為0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L；藥物刺激48h。對(duì)照組不接受藥物刺激。CCK8法檢測各組細(xì)胞增殖情況；逆轉(zhuǎn)錄-

5、聚合酶鏈反應(yīng)（ReversTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR）法檢測MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量；免疫熒光（Immunofluorescence，IF）法檢測Ⅰ型膠原蛋白分布及表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、SB203580對(duì)HFSFs細(xì)胞增殖的影響
　　藥物干預(yù)48h后CCK8法檢測各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組細(xì)胞于450nm波長處吸光值（OD值），對(duì)照組

6、OD值0.908±0.020，各實(shí)驗(yàn)組根據(jù)藥物濃度從低到高OD值依次為0.902±0.264、0.900±0.026、0.878±0.040、0.886±0.029、0.883±0.041。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），OD值無明顯變化。
　　2、SB203580對(duì)MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響
　　RT-PCR法檢測各組MMP-2、TIMP-2及Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量

7、。各實(shí)驗(yàn)組根據(jù)藥物濃度從低到高，MMP-2mRNA相對(duì)表達(dá)量依次為0.966±0.022、0.920±0.023、0.847±0.027、0.758±0.030、0.704±0.010，與對(duì)照組（相對(duì)表達(dá)量為1）相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其相對(duì)表達(dá)量均有不同程度降低；TIMP-2mRNA相對(duì)表達(dá)量依次為1.002±0.064、1.013±0.079、1.007±0.086、1.038±0.060、0.990±0.090，與對(duì)

8、照組（相對(duì)表達(dá)量為1）相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其相對(duì)表達(dá)量無明顯變化；Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量依次為1.082±0.061、1.162±0.051、1.390±0.017、1.521±0.102、1.732±0.087，與對(duì)照組相比，0.1μmol/L實(shí)驗(yàn)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各實(shí)驗(yàn)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Ⅰ型膠原mRNA相對(duì)表達(dá)量有不同程度的增高。
　　3、SB203580對(duì)Ⅰ型膠原