轉化生長因子-β-,2-對體外培養(yǎng)豚鼠鞏膜成纖維細胞的影響.pdf

1、研究近視發(fā)病機制對于防止各種致盲性并發(fā)癥和探索近視的康復手段都具有極其重要的意義。國內外對哺乳類動物近視眼模型的研究已經(jīng)表明鞏膜的病理性改變表現(xiàn)為：細胞成分減少，細胞外基質表達的改變等。這些是導致眼軸增長和近視性屈光改變的重要原因。大量的近視眼相關研究提示近視的發(fā)生是在異常視覺信息的作用下，視網(wǎng)膜、脈絡膜內多種神經(jīng)遞質和生長因子的表達發(fā)生改變，通過一些系列信號轉導過程使鞏膜成纖維細胞的增生、代謝和細胞外基質發(fā)生改變。已有多種物質被證明可

2、能參與這一信號轉導，如多巴胺，乙酰膽堿，一氧化氮等。但是研究者們推測，上述因子并不是直接作用于鞏膜細胞和細胞外基質，而是在異常視覺信息導致鞏膜病理性改變的信號轉導過程中的上游信號分子，它們通過某種特定的因子發(fā)揮著對鞏膜的終端調控作用。因此，尋找和確定調控鞏膜改變的生物活性物質，并同時明確其作用機制是近視研究中的一個關鍵內容。 轉化生長因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)是一類多功能的調節(jié)細

3、胞生長、分化的細胞因子。人體內存在TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3三種形式，它們具有相似的生物學作用。TGF-β剛分泌時處于“潛活”狀態(tài)，在一定條件下被激活并發(fā)揮生物學作用。TGF-β對細胞的生長、分化具有雙向調節(jié)作用，其作用與細胞類型、來源等有關。TGF-β還參與損傷修復、免疫反應、胚胎發(fā)育等重要的病理、生理過程晴[50]，亦是細胞外基質的有效調節(jié)因子，可增強膠原等的合成，而減少基質的降解，導致細胞外基質的沉積。TGF-β相應

4、受體有三種，稱為TβRI、TβRⅡ、TβRⅢ，其中Ⅰ、Ⅱ型受體是參與信息傳遞的主要分子，TpRill的功能目前尚不明確，可能也是信號轉導的組成部分[51]。2004年Jobling等[29]研究發(fā)現(xiàn)，哺乳類動物近視眼模型鞏膜中轉化生長因子-β2的表達顯著下降，提示轉化生長因子-β2可能是引起鞏膜重塑的直接因子。本實就TGF-β2對體外培養(yǎng)豚鼠鞏膜成纖維細胞(Guineapigscleralfibroblasts，GSF)的影響作一實驗研

5、究，從而探討TGF-β2與近視發(fā)生機制的關系。 材料與方法 隨機選取健康三色出生1～3天的豚鼠，雌雄兼用，體重80～120克。體外培養(yǎng)GSF，依次進行原代GSF的形態(tài)學觀察，GSF的鑒定，免疫組化檢測MMP-2(matrixmetalloproteinase-2)／TIMP-2(tissueinhibitorofmetalloproteinase-2)的表達情況。取第3～6代的細胞進行藥物實驗，觀察TGF-β2對體外培養(yǎng)

6、GSF增生的時間、劑量效應關系，對膠原合成的影響以及對MMP-2／TIMP-2表達的劑量效應關系。 結果 1．GSF鑒定陽性，體外培養(yǎng)GSF正常情況下表達MMP-2／TIMP-2，原代、傳代培養(yǎng)生長情況良好，凍存復蘇后在倒置顯微鏡下觀察形態(tài)與凍存前無明顯差異。 2．與對照組相比TGF-β2在O．01ng．ml-1～lO．OOng．ml-1濃度范圍內與GSF的增生呈劑量效應關系(P＜O．05)，并以10．OOng．

7、ml-1濃度時促進增生作用最顯著(P＜0．01)，濃度再增加，其促進增生作用反而略有減弱。 3．從第2天開始試驗組和對照組相比較TGF-β2對鞏膜成纖維細胞有顯著的促增生作用(P＜O．05)。 4．與對照組相比較濃度為0．1ng．ml-1～50．OOng．ml-1的TGF-β2能有效刺激鞏膜成纖維細胞膠原蛋白合成，并呈劑量效應關系，當濃度為50．OOng．ml-1時，作用達到飽和 5．TGF-β2在1．OOng．

8、ml-1時上清液中MMP一2的含量與對照組相比明顯降低(P＜0．05)，在10．OOng．m1-1-50．OOng．ml-1時下降更為明顯(P＜0．01)。而TIMP-2則在O．01ng．m1-1～50．OOng．ml-1范圍內隨著濃度的增加上清液中的含量沒有明顯改變。 結論 1．TGF-β2可以顯著的促進GSF增生，并呈時間劑量效應依賴關系。 2．TGF-β2一定濃度范圍內隨著濃度的增加能有效刺激鞏膜成纖維細胞