hAMSC對小鼠卵巢上皮細(xì)胞向卵母細(xì)胞樣細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：建立人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞(hAMSC)和小鼠卵巢上皮細(xì)胞（OSEC）共培養(yǎng)模型，初步探討hAMSC對小鼠OSEC向卵母細(xì)胞樣細(xì)胞分化的影響。
　　方法：采用酶消化法和差速貼壁法分離、純化 hAMSC和小鼠 OSEC，流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色分別鑒定 hAMSC和OSEC。應(yīng)用transwell板，建立hAMSC和小鼠OSEC共培養(yǎng)模型，觀察hAMSC對小鼠OSEC細(xì)胞形態(tài)變化，免疫組化、圖像分析與實(shí)時聚合酶鏈反應(yīng)（RT-P

2、CR）檢測上皮細(xì)胞、多能性和生殖細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：① P4代hAMSC呈長梭形、漩渦狀貼壁生長，流式細(xì)胞術(shù)鑒定hAMSC高表達(dá)CD44、CD90、CD73、CD105，不表達(dá)或低表達(dá)CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR。②免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，傳至P2代的小鼠OSEC陽性表達(dá)廣譜角蛋白Pan-cytokeratin，提示小鼠OSEC為上皮細(xì)胞性來源。P3 OSEC與hAMSC共培養(yǎng)組

3、與OSEC單獨(dú)培養(yǎng)組OSEC均表達(dá)上皮角蛋白Pan-cytokeratin陽性，并可表達(dá)生殖細(xì)胞特異性的標(biāo)志物Ddx4/MVH和多能性標(biāo)志蛋白Oct4，且共培養(yǎng)組小鼠OSEC Pan-cytokeratin、Ddx4/MVH、Oct4三種蛋白表達(dá)明顯高于單獨(dú)培養(yǎng)組（ P<0.05）。③ RT-PCR檢測結(jié)果顯示，共培養(yǎng)組小鼠OSEC生殖干細(xì)胞特征標(biāo)志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVH mRNA表達(dá)量顯著高于單獨(dú)培養(yǎng)組（P<0.