Ezrin對小鼠卵母細胞體外成熟的影響.pdf

1、Ezrin是ERM蛋白家族一員，在多種細胞中橋接細胞骨架與質膜，參與細胞形態(tài)維持、細胞粘附、細胞遷移及信號轉導等多種細胞功能。有研究表明該家族蛋白參與了小鼠卵母細胞皮層緊張度的調控及第二次成熟分裂時紡錘體的定位。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，小鼠GV期到MII期的卵母細胞均有Ezrin及其磷酸化修飾的活性形式存在，但其在小鼠卵母細胞成熟過程究竟發(fā)揮什么作用尚不清楚。本試驗以小鼠GV期裸卵為材料，通過顯微注射特異性siRNA敲低Ezrin的方法研究

2、了該蛋白在小鼠卵母細胞發(fā)育成熟中的作用以及對受精后胚胎發(fā)育潛力的影響。研究內容與結果如下：
　　1.顯微注射Ezrin-siRNA后不同時間小鼠GV期裸卵內Ezrin的表達水平
　　向小鼠GV期裸卵顯微注射Ezrin-siRNA或NC-siRNA（陰性對照），在含Milrinone（抑制細胞核分裂）M2中分別抑制0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h和36 h后，用Ezrin特異性抗體進行熒光染色并用Imag

3、e J軟件分析所獲圖片的平均熒光值。結果發(fā)現(xiàn)：在顯微注射后18～30 h期間，試驗組Ezrin表達量顯著低于對照組（P＜0.05）。
　　2.Milrinone阻滯不同時間對小鼠GV期裸卵體外成熟率的影響
　　將小鼠GV期裸卵在Milrinone培養(yǎng)液中分別阻滯0 h（對照組）、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h和36 h后，統(tǒng)計各組卵母細胞成熟率（以排出PBI計）。結果顯示，阻滯時間≤18 h，各組卵母細胞成熟

4、率與對照組無顯著差異（P＞0.05）；阻滯時間≥24 h，則卵母細胞成熟率顯著低于對照組及阻滯時間≤18 h的各試驗組（P＜0.05）。
　　3.敲低Ezrin對小鼠卵母細胞細胞體外成熟的影響
　　向小鼠GV期裸卵中顯微注射Ezrin-siRNA或NC-siRNA（陰性對照）后，Milrinone阻滯18 h再繼續(xù)成熟培養(yǎng)，結果發(fā)現(xiàn)：敲低Ezrin蛋白后，小鼠卵母細胞體外成熟率顯著低于對照組（P＜0.05）；皮層顆粒（cor

5、tical granule,CGs）異常分布率及MII期紡錘體位置異常率顯著高于對照組（P＜0.05）；表面微絨毛長度顯著降低（P＜0.05），密度極顯著降低（P＜0.01）。
　　4.敲低Ezrin后對小鼠卵母細胞IVF的影響
　　分別取試驗組（GV期注射Ezrin-siRNA）和對照組（GV期注射NC-siRNA）所獲得的小鼠MII期卵母細胞進行體外受精（IVF），結果發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，GV期敲低Ezrin導致小鼠成熟