EAE小鼠腦及脊髓組織中IL-17及c-Maf表達與病程關系的研究.pdf

1、目的：
　　探討IL-17及c-Maf在實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）小鼠不同發(fā)病時期腦及脊髓組織中的動態(tài)變化，進一步探討IL-17及c-Maf在EAE的發(fā)病機制中的作用。
　　方法：
　　按照隨機數字法將36只10-12周齡，體重在18-22g之間的雌性C57BL/6小鼠，分為EAE組18只和對照組18只。本研究采用髓鞘少突細胞糖蛋白

2、（myelinoligodendrocyteglycoprotein，MOG）35-55多肽/完全弗氏佐劑（CFA）的方法免疫C57BL/6小鼠制備EAE模型。對照組小鼠僅給予生理鹽水注射。每天觀察每只小鼠的臨床表現，稱重并參照評分標準進行神經功能評分。將免疫后第10天記為發(fā)病前期，第18天記為發(fā)病高峰期，第30天記為緩解期，并在兩組中分別取材，記為發(fā)病高峰期組和緩解期組。將兩組小鼠按不同時期處死后取腦組織做石蠟切片，觀察炎癥細胞浸潤的

3、情況，取脊髓組織做LFB染色，觀察脫髓鞘情況。采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）檢測各時期兩組小鼠腦及脊髓組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA含量并進行比較，觀察各個時期的動態(tài)表達情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以x±SD表示，所有數據進行方差齊性檢驗和正態(tài)性檢驗，比較采用t檢驗，多組間參數比較采用單因素方差分析

4、，計量資料組間比較進行方差分析和q檢驗。檢驗水準α=0.05，以P<0.05作為差異顯著性指標。
　　結果：
　　1、動物發(fā)病情況：EAE組的小鼠均出現臨床癥狀，體重明顯下降，平均體重均低于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；且EAE組神經功能評分均高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　2、組織病理學觀察：
　　2.1HE染色
　　2.1.1發(fā)病前期：EAE組中小鼠的腦組織中發(fā)現少數單核細胞

5、和淋巴樣細胞浸潤，未見血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現。
　　2.1.2發(fā)病高峰期：EAE小鼠的腦組織中出現大量單核細胞和淋巴樣細胞浸潤和血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現。
　　2.1.3緩解期：EAE小鼠的腦組織中單核樣細胞和淋巴樣細胞減少，血管袖套樣改變消失。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現。
　　2.2LFB染色
　　2.2.1發(fā)病前期：EAE小鼠的脊髓組織中出現白質疏

6、松。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現。
　　2.2.2發(fā)病高峰期：EAE小鼠的脊髓組織中可見明顯脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現。
　　2.2.3緩解期：EAE小鼠的脊髓組織中可見脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現。
　　3、腦組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及動態(tài)變化
　　3.1腦組織中IL-17mRNA的含量：
　　3.1.1發(fā)病前期：EAE組小鼠的腦

7、組織中IL-17mRNA表達比對照組高，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.1.2發(fā)病高峰期：EAE組小鼠的腦組織中IL-17mRNA表達明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.1.3緩解期：EAE組小鼠的腦組織的IL-17mRNA表達高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.1.4動態(tài)變化：對照組中，IL-17mRNA在各時間點的表達差距不大，沒有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。EAE

8、組中，IL-17mRNA各時間點表達顯示，發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.2腦組織中c-MafmRNA的含量：
　　3.2.1發(fā)病前期：EAE組的c-MafmRNA表達較對照組高，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.2.2發(fā)病高峰期：EAE組的c-MafmRNA表達明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.2.3緩解期：EAE組的c-MafmRNA表達

9、高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　3.2.4動態(tài)變化：空白對照組各時間點c-MafmRNA表達差距不大，沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）。EAE組各時間點c-MafmRNA表達發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4、脊髓組織中IL-17mRNA及c-MafmRNA的含量及動態(tài)變化
　　4.1脊髓組織中IL-17mRNA的含量：
　　4.1.1發(fā)病前期：EAE組的IL

10、-17mRNA表達較對照組高，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.1.2發(fā)病高峰期：EAE組的IL-17mRNA表達明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.1.3緩解期：EAE組的IL-17mRNA表達高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.1.4動態(tài)變化：對照組各時間點IL-17mRNA表達差距不大，沒有統(tǒng)計學意差異（P>0.05）。EAE組各時間點IL-17mRNA表達發(fā)病高峰期

11、高于發(fā)病前期和緩解期，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.2脊髓組織中c-MafmRNA的含量：
　　4.2.1發(fā)病前期：EAE組的c-MafmRNA表達較對照組高，有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.2.2發(fā)病高峰期：EAE組的c-MafmRNA表達明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.2.3緩解期：EAE組的c-MafmRNA表達高于對照組，具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。