鹽酸法舒地爾對EAE小鼠ROCK-Ⅱ及IFN-γ、IL-10、IL-17表達影響的研究.pdf

1、目的：本實驗應(yīng)用鹽酸法舒地爾(Fasudilhydrochloride)干預(yù)治療髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白35-55多肽(myelinoligodendrocyteglycoproteinpeptides35-55，MOG35-55)誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)模型，觀察各組臨床癥狀、病理變化，檢測各組小鼠腦中ROCK-Ⅱ的表達，以

2、及脾淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞上清液中IFN-γ、IL-10、IL-17等細(xì)胞因子分泌的變化，研究Rho/Rock信號途徑在EAE發(fā)病中的作用，觀察Rho激酶抑制劑鹽酸法舒地爾對EAE的治療效果及其對ROCK-Ⅱ、脾淋巴細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞因子分泌的影響，進而探討EAE的發(fā)生、發(fā)展機制及應(yīng)用鹽酸法舒地爾治療EAE的作用機制，為多發(fā)性硬化的治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：雌性C57BL/6小鼠(18-20g)60只，按平均體重分為3組，EA

3、E組、治療組和佐劑組各20只。用MOG35-55誘導(dǎo)EAE模型，佐劑組以等量生理鹽水代替。治療組于免疫后第6天開始按50mg/kg·d腹腔注射鹽酸法舒地爾液，連續(xù)14天，EAE組和佐劑組用等量的生理鹽水作為對照。觀察和比較各組小鼠的一般情況、體重變化、臨床表現(xiàn)，并進行癥狀評分。免疫后第18-20天各組取出8只小鼠，無菌分離脾臟淋巴細(xì)胞，制備細(xì)胞懸液。用MTT法檢測各組脾臟淋巴細(xì)胞的增殖情況，用ELISA法檢測并比較各組淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液

4、中細(xì)胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的水平。免疫后18-20天麻醉后處死動物，解剖分離腦和脊髓，行HE染色，髓鞘染色觀察病理變化，Westernblot法檢測各組ROCK-Ⅱ的表達。采用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行分析處理。
　　 結(jié)果：
　　 1.利用MOG35-55多肽成功地誘導(dǎo)了C57BL/6小鼠EAE模型，HE染色顯示EAE組小鼠脊髓明顯炎性浸潤，髓鞘染色可見明顯的髓鞘脫失。與EAE組相比，治療組癥

5、狀出現(xiàn)晚、表現(xiàn)輕，發(fā)病率、體重改變、平均最高癥狀評分差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)，炎性細(xì)胞浸潤及髓鞘脫失改變明顯減輕。佐劑組未見發(fā)病，體重呈增長趨勢。
　　 2.EAE組脾臟淋巴細(xì)胞增殖作用明顯(P＜0.01)；并且淋巴細(xì)胞上清液中INF-γ、IL-17分泌增多(P＜0.05)。鹽酸法舒地爾對脾臟淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)具有明顯的抑制作用(P＜0.01)，并且顯著抑制INF-γ、IL-17的分泌(P＜0.05)，對IL-10的分

6、泌則有明顯促進作用(P＜0.05)。
　　 3.EAE組、治療組和佐劑組小鼠腦中均有ROCK-Ⅱ的表達。EAE組ROCK-Ⅱ表達量較佐劑組要高(P＜0.05)，治療組與EAE組相比顯著減低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.鹽酸法舒地爾可以有效治療小鼠EAE，減低發(fā)病率，緩解臨床癥狀，減輕炎性浸潤和髓鞘脫失。
　　 2.鹽酸法舒地爾能夠抑制T細(xì)胞增殖及INF-γ等促炎性細(xì)胞因子分泌，促進IL-10