MicroRNA-125b抑制惡性黑色素瘤細胞的生長及相關信號通路的研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406521213441南昌大學碩士研究生學位論文MicrNA125b抑制惡性黑色素瘤細胞的生長抑制惡性黑色素瘤細胞的生長及相關信號通路的研究及相關信號通路的研究TheeffectofmiR125bonmalignantmelanomacellstheresearchontherelativesignalpathway彭麗培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：劉偉教授申請學位的學科門類：

2、醫(yī)學學科專業(yè)名稱：外科學論文答辯日期：2016年6月答辯委員會主席：評閱人：2016年6月摘要II摘要背景：背景：黑色素瘤是一種侵襲性極強的惡性腫瘤，在過去30年它是所有類型癌癥中發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤之一。雖然經歷了幾十年的研究和藥物開發(fā)，但其治療效果仍不理想，該腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機制也尚未完全闡明。目前已知miRNA是一類非編碼小分子RNAs，在轉錄后水平調控基因的表達，參與生物復雜生命過程的調控，尤其是腫瘤的發(fā)生和進展。因此，

3、嘗試通過對黑色素瘤miRNA及其靶基因和相關信號通路的研究，為黑色素瘤的早期診斷和治療提供新依據。目的：目的：預實驗已經證實miR125b在黑色素瘤中低表達，靶基因是MLK3。本實驗通過構建miR125b過表達穩(wěn)轉黑色素瘤細胞系，觀察過表達miR125b對細胞增殖、凋亡和周期的影響，確定miR125b在黑色素瘤中的抑癌作用，并進一步探索與miR125b發(fā)揮抑瘤作用相關的可能信號通路。闡明miR125b在黑色素瘤中發(fā)揮抑癌基因作用的分子機

4、制，為后期臨床治療提供依據。方法：方法：構建micrNA125b過表達慢病毒，轉染原發(fā)性黑色素瘤細胞A375和侵襲性黑色素瘤胞SKMEL5，得到穩(wěn)定轉染細胞株。轉染目的病毒的為實驗組A375125bup、SK125bup，轉染空載病毒的為陰性對照組A375negative、SKnegative，未轉染病毒的為空白組A375、SKMEL5。采用RTPCR法檢測各組細胞miR125b的表達水平，MTT法檢測細胞的增殖情況，流式細胞術檢測細胞

5、的凋亡和細胞周期。WesternBlot檢測靶蛋白MLK3的表達水平，及各通路上關鍵蛋白(pCjun、Cjun、ERK12、MEK2、pAKT、AKT1)的表達水平。結果：結果：1.RTPCR結果顯示：miR125b在實驗組細胞中的表達量較空白組、陰性對照組的表達量明顯增多（P0.05）。2.MTT結果顯示：A375125bup細胞與A375negative細胞、空白組細胞相比增殖活性明顯降低(P＜0.05)，而A375negative