S100P和S100A2蛋白在人外泌汗腺的表達及SD大鼠足墊汗腺的生長發(fā)育研究.pdf

1、目的：
　　1.研究S100P和S100A2蛋白在人外泌汗腺的表達情況，并聯(lián)合特定角蛋白進行免疫熒光雙染以區(qū)分外泌汗腺的分泌部和導管部。2.研究SD大鼠足墊汗腺發(fā)生發(fā)育和功能成熟的過程。
　　方法：
　　1.獲取人體正常皮膚標本，制成石蠟包埋標本后進行連續(xù)切片，利用免疫熒光組織化學染色法檢測S100P和S100A2在外泌汗腺的表達情況，然后利用免疫熒光雙染檢測以下蛋白：α-SMA/S100P，CK14/S100A2，C

2、K7/S100A2，CK15/S100P和CK18/S100A2，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。2.獲取SD大鼠從E16.5天-E21.5天、出生后P1-P14天、3周、4周及成年大鼠的足墊全層皮膚標本，進行石蠟包埋及切片，行HE染色，及免疫熒光組織化學染色法檢測以下蛋白：CAⅡ、F-actin、β-catenin、CollagenⅣ；免疫熒光雙染檢測：α-SMA/CK14；并利用碘－淀粉實驗檢測不同發(fā)育階段SD大鼠足墊的發(fā)汗功能。

3、　　結果：
　　1.人外泌汗腺免疫熒光組織化學染色結果顯示：S100P僅表達于汗腺導管部的內層細胞，S100A2表達于除表皮內導管外的其他導管部的外層細胞，兩者在分泌部均不表達。2.SD大鼠足墊皮膚HE染色結果顯示：E19.5天表皮基底層出現(xiàn)汗腺胚芽，P1天汗腺細胞長入真皮淺層，并呈條索狀繼續(xù)向真皮深層生長，P7天部分汗腺形成中央腔，P10天分泌部腺體初步形成球狀結構。熒光染色顯示：汗腺側膜持續(xù)表達β-catenin，P6天汗腺細

4、胞開始表達CollagenⅣ，P9天F-actin開始在頂膜表達，P13天以上極性蛋白均分別完整表達于汗腺側膜、基底膜和頂膜。CAⅡ的熒光染色和α-SMA+CK14的雙染結果顯示：CK14在汗腺細胞持續(xù)表達，P6天部分汗腺細胞開始表達CAⅡ和α-SMA，而內層細胞CK14表達則逐漸減弱，P13天分泌部散在的分泌細胞表達CAⅡ，分泌細胞完全不表達CK14，肌上皮細胞表達CK14和α-SMA，導管部細胞均表達CK14，不表達CAⅡ和α-SM

5、A，與成年大鼠的表達情況一樣。碘－淀粉實驗結果顯示：直到P14天SD大鼠足墊汗腺才開始出現(xiàn)泌汗功能，P21天泌汗功能得到進一步完善。
　　結論：
　　1.S100P和S100A2可作為外泌汗腺導管部不同細胞的標記蛋白，將S100P或S100A2聯(lián)合CK7或CK15或CK18進行免疫熒光組織化學雙染，可快速、準確、直觀地區(qū)分外泌汗腺分泌部和導管部。2.SD大鼠出生時足墊汗腺僅完成了初級發(fā)育，細胞分化以及汗腺結構和功能成熟主要發(fā)