絲素蛋白熒光微-納米顆粒的制備及其與細(xì)胞的相互作用.pdf

1、不同細(xì)胞對不同尺寸的絲素蛋白顆粒表現(xiàn)出不同的粘附或內(nèi)吞行為。用絲素顆粒作為藥物控制釋放載體時，細(xì)胞是否對其粘附或內(nèi)吞，將直接影響其裝載的藥物的傳遞效率和對細(xì)胞的作用位點。為了探討不同細(xì)胞對不同尺寸的絲素顆粒表現(xiàn)出的相應(yīng)的細(xì)胞行為，本文用高壓靜電噴射技術(shù)等方法制備四種不同粒徑的絲素蛋白顆粒，分別與人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926和人宮頸癌細(xì)胞HeLa共培養(yǎng)，研究四種絲素顆粒與兩種細(xì)胞的相互作用規(guī)律，為向正常組織細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞輸送藥物時

2、選擇相應(yīng)的絲素載體尺寸提供初步依據(jù)。
　　首先，采用高壓靜電噴射等方法制備出四種不同粒徑的微/納米顆粒，并采用異硫氰酸熒光素（FITC）和量子點（QD）兩種物質(zhì)，標(biāo)記絲素微/納米顆粒，獲得絲素蛋白熒光微/納米顆粒。用掃描電鏡（SEM）觀察絲素微/納米顆粒的表面形貌，同時用激光共聚焦、透射電鏡、傅立葉變換紅外吸收光譜、能譜、熒光光譜儀等手段對熒光微/納米顆粒進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，所制得的四種微/納米顆粒的平均粒徑分別為232.1μm、

3、105.1μm、1.9μm、51.1 nm，且四種微/納米顆粒形狀呈球形或橢球形，表面有小顆粒狀物質(zhì)、形貌粗糙；兩種熒光標(biāo)記物均能標(biāo)記到絲素蛋白微/納米顆粒表面，且量子點標(biāo)記的微/納米顆粒具有較高的熒光穩(wěn)定性。
　　其次，研究了粒徑為1.9μm（SFMP3）和51.1 nm（SFNP）的絲素蛋白顆粒與細(xì)胞的相互作用。采用熒光示蹤的方法動態(tài)跟蹤EA.hy926細(xì)胞和HeLa細(xì)胞對SFMP3和SFNP的粘附及攝取，并用CCK-8法檢測

4、不同濃度的絲素顆粒及兩種不同方式標(biāo)記后絲素顆粒的細(xì)胞增殖。結(jié)果表明，微米級絲素顆粒（SFMP3）對細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，在HeLa細(xì)胞培養(yǎng)基中絲素微米顆粒濃度大于0.5 mg/ml時，這一作用比EA.hy926細(xì)胞顯著；而納米級絲素顆粒（SFNP）對細(xì)胞的增殖有抑制作用，對EA.hy926細(xì)胞的抑制作用比對HeLa細(xì)胞的抑制作用顯著。對與EA.hy926細(xì)胞和HeLa細(xì)胞共培養(yǎng)的絲素顆粒進(jìn)行跟蹤觀察的結(jié)果表明，微米級顆粒與細(xì)胞培養(yǎng)后能與細(xì)

5、胞貼附，但不會被細(xì)胞攝?。欢{米級顆粒則在與細(xì)胞共培養(yǎng)后會被細(xì)胞攝入，隨著時間的延長攝入量越多，HeLa細(xì)胞對絲素納米顆粒的攝入能力明顯比EA.hy926細(xì)胞強(qiáng)。
　　最后，研究了細(xì)胞在絲素微球（SFMP1和 SFMP2）表面的粘附及生長。掃描電鏡（SEM）觀察結(jié)果表明，HeLa細(xì)胞和EA.hy926細(xì)胞在與絲素微球共培養(yǎng)8-12 h后，培養(yǎng)板表面粘附的細(xì)胞開始遷移并粘附在微球表面，隨著培養(yǎng)時間的延長，粘附在微球表面的細(xì)胞開始鋪展