潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型TNF-α、Beclin1的變化及健脾益腸散的干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　本實驗通過觀察潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis，UC)大鼠模型一般狀況、疾病活動指數(shù)(Disease Activity Index，DAI)評分、結(jié)腸組織病理學(xué)改變以及血清中TNF-α、結(jié)腸黏膜組織Beclin1的含量，及不同藥物干預(yù)治療后上述指標的變化，探討TNF-α和Beclin1與UC的關(guān)系以及健脾益腸散治療UC大鼠的作用機理，為其臨床推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　將60只

2、大鼠按隨機數(shù)字表法選取10只為正常組，其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇法建立UC大鼠模型。將造模后的大鼠又隨機分為模型組、柳氮磺吡啶組和健脾益腸散高、中、低劑量組，每組10只。正常組正常飼養(yǎng)，模型組予蒸餾水灌胃，柳氮磺吡啶組予柳氮磺吡啶藥液灌胃，健脾益腸散高、中、低劑量組分別予相應(yīng)濃度的健脾益腸散灌胃。連續(xù)灌胃21天，記錄各組大鼠飲食、體質(zhì)量、大便性狀及精神狀態(tài)等進行DAI評分；觀察病變處結(jié)腸組織病理學(xué)改變；并采用E

3、LISA法測定各組大鼠血清中TNF-α的含量、免疫組化法和Western blot法檢測結(jié)腸黏膜組織中Beclin1的表達。
　　結(jié)果:
　?。?）正常組大鼠進食量逐漸增加，體質(zhì)量加重，活潑好動，皮毛光亮，大便正常，呈卵圓形褐色顆粒狀；模型組大鼠在造模后立即出現(xiàn)精神萎靡，喜拱背、扎堆，進食及飲水明顯減少，體質(zhì)量減輕，皮毛暗淡無光雜亂污穢，肛周可見膿血樣稀便附著，個別見陰囊下垂，都有不同程度的黏液膿血便、腹瀉、便不成形等，2周

4、后上述癥狀逐漸好轉(zhuǎn)，但至實驗結(jié)束時仍有腹瀉、便不成形情況。健脾益腸散高劑量與中劑量組及柳氮磺吡啶組造模后亦出現(xiàn)上述癥狀，但經(jīng)予相應(yīng)藥物治療后約1周左右，即有不同程度的緩解，進食及進水均有所增多，體質(zhì)量增長，腹瀉及膿血便逐漸減少；約2周后黏液膿血便等現(xiàn)象顯著減少，大便恢復(fù)成顆粒狀。（2）模型組的DAI評分明顯較正常組升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；健脾益腸散高、中劑量組及柳氮磺吡啶組的DAI評分與模型組相比均顯著降低（P＜0.01

5、）；健脾益腸散高劑量組與柳氮磺吡啶組的DAI評分差異不顯著（P＞0.05），但較健脾益腸散中、低劑量組的DAI評分低（P＜0.05或P＜0.01）。（3）正常組大鼠組織病理學(xué)顯示，結(jié)腸粘膜上皮完整，各層組織結(jié)構(gòu)清晰，腺體排列整齊，粘膜層、粘膜下層未見炎癥細胞浸潤，未見充血、水腫及潰瘍的發(fā)生。模型組大鼠各層組織結(jié)構(gòu)破壞，細胞間隙增寬，潰瘍灶形成，個別深達固有層，可見中性粒細胞廣泛浸潤，并伴有杯狀細胞丟失。健脾益腸散高、中劑量組結(jié)腸粘膜上皮

6、基本完整，各層結(jié)構(gòu)較清晰，可見散在中性粒細胞浸潤，而炎癥細胞浸潤明顯減輕。柳氮磺吡啶組各層結(jié)構(gòu)基本清晰，散在少量中性粒細胞和炎癥細胞浸潤。（4）模型組大鼠血清 TNF-α水平顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P＜0.01);健脾益腸散高劑量組和柳氮磺吡啶組的血清TNF-α水平與模型組比較均降低( P＜0.05);健脾益腸散高劑量組與中劑量組、柳氮磺吡啶組差異不顯著( P＞0.05)，但較低劑量組降低(P＜0.05)。（5）免疫組化檢測

7、法：Beclin1陽性表達可見于結(jié)腸黏膜下層及肌層。各組大鼠結(jié)腸組織Beclin1陽性表達平均OD值統(tǒng)計結(jié)果顯示，模型組大鼠結(jié)腸Beclin1蛋白表達較正常組增加（P＜0.05）；健脾益腸散高、中、低劑量組及柳氮磺吡啶組Beclin1蛋白表達均較模型組增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；健脾益腸散高劑量組與柳氮磺吡啶組比較差異不顯著（P>0.05）。Western blot檢測法：正常組有低水平Beclin1蛋白表達，

8、各實驗組大鼠結(jié)腸組織提取的蛋白在相對分子量約41KD處出現(xiàn)陽性條帶，模型組Beclin1蛋白表達增高，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。健脾益腸散高、中、低劑量組及柳氮磺吡啶組Beclin1表達均較模型組增高（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：（1）健脾益腸散可以緩解UC大鼠的一般情況，減輕粘膜損傷情況，降低DAI評分，高劑量組優(yōu)于中、低劑量組，與柳氮磺吡啶組效果相仿。（2）造模成功后的UC大鼠其血清中TNF-α和結(jié)腸黏膜