丹酚酸組分結(jié)構(gòu)特征解析及整體生物藥劑學(xué)性質(zhì)的表征.pdf

1、中藥中已知或未知的化學(xué)成分有數(shù)十乃至成百上千種，各化學(xué)成分的含量和生物活性存在差別，進(jìn)行中藥組分及其制劑的評(píng)價(jià)時(shí)，不能兼顧每一個(gè)成分，如何在中藥眾多的化學(xué)成分中選擇指標(biāo)性成分用以研究組分的整體性質(zhì)，進(jìn)而反映中藥的整體性特點(diǎn)，這是中藥制劑研究的當(dāng)務(wù)之急。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，中藥制劑的研究也漸漸深入到組分層次。本課題基于中醫(yī)藥整體觀，以丹酚酸組分為研究模型，初步探討了以中藥組分為基礎(chǔ)的中藥制劑研究新思路。主要研究內(nèi)容如下:
　

2、　第一章對(duì)中藥組分生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)的構(gòu)建以及丹酚酸組分化學(xué)成分和防治腦缺血藥理作用的研究進(jìn)展做了整體闡述。在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，從中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究的發(fā)展歷程、有限個(gè)代表性成分論“N”、表征組分整體性質(zhì)的數(shù)理模型、組分生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)的構(gòu)建等方面探討了中藥制劑研究的新模式。并對(duì)丹酚酸組分的化學(xué)成分、丹參防治腦缺血疾病的作用機(jī)制及研究進(jìn)展這兩個(gè)方面做了深入的總結(jié)和闡述。
　　第二章首先模擬體內(nèi)血腦屏障，建立體外血腦屏障(BBB)模

3、型，并運(yùn)用該模型從體外的角度快速篩選出丹酚酸組分中可能作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥效成分。結(jié)果表明利用該模型從丹酚酸組分中篩選出至少有6種成分能夠穿越BBB模型，這6中成分被確認(rèn)為丹參素、原兒茶酸、咖啡酸、異阿魏酸、紫草酸、迷迭香酸。其次采用人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的缺糖缺氧(OGD)模型優(yōu)化篩選丹酚酸組分中代表性成分。對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察表明，丹酚酸組分及各有效成分組合均能有效減輕缺氧對(duì)細(xì)胞形態(tài)的損傷，其中迷迭香酸+丹參素+原兒茶酸+異阿魏酸+咖

4、啡酸（主成分A）組和迷迭香酸+丹參素+原兒茶酸+異阿魏酸+咖啡酸+紫草酸（主成分B）組對(duì)細(xì)胞保護(hù)作用較好;相關(guān)生化因子的測(cè)定結(jié)果表明，丹酚酸組分及主成分B均能減輕氧化損傷(T-SOD、MDA、GSH-PX和CAT)，緩解細(xì)胞的缺氧損傷，降低炎癥因子(TNF-α、IL-6、sICAM-1)的表達(dá)從而達(dá)到保護(hù)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，緩解缺血后神經(jīng)功能的損傷的目的，且無顯著差異(P＞0.05)。對(duì)細(xì)胞中MMP-9、VEGF蛋白的表達(dá)及MMP-9、V

5、EGF mRNA的表達(dá)結(jié)果表明，主成分B組與丹酚酸組分相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　第三章采用MCAO模型驗(yàn)證丹酚酸組分的代表性成分。結(jié)果表明丹酚酸組分及主成分B組均具有保護(hù)腦缺血損傷的功效，且無顯著差異:即可顯著減輕腦缺血大鼠神經(jīng)功能缺損、減少腦梗死面積;改善氧化指標(biāo):升高SOD、CAT、GSH-PX，降低MDA含量;提高VEGF、TIMP-1表達(dá)，降低p-p38MPAK、TLR-4、NFkBp65、Caspase-3

6、、 MMP-2、MMP-9表達(dá);下調(diào)bax表達(dá)，上調(diào)bcl-2表達(dá)，抑制了細(xì)胞的凋亡;降低NMDAR1 mRNA表達(dá)及增加VEGF mRNA的表達(dá)。
　　第四章采用HPLC解析丹酚酸組分代表性成分的結(jié)構(gòu)。最終確定丹參素、原兒茶酸、咖啡酸、異阿魏酸、紫草酸、迷迭香酸在組分中的含量分別為12.47％、3.98％、3.01％、6.05％、7.36％和20.96％，相互之間的量比關(guān)系丹參素∶原兒茶酸∶咖啡酸∶異阿魏酸∶迷迭香酸∶紫草酸為4

7、.14∶1.32∶1.00∶2.01∶6.93∶2.45。
　　第五章測(cè)定了前文所篩選得到的代表性成分的平衡溶解度、表觀油水分配系數(shù)和Caco-2細(xì)胞滲透性等性質(zhì)值，并運(yùn)用數(shù)學(xué)模型對(duì)它們的性質(zhì)值進(jìn)行相似性分析和進(jìn)一步整合表征。結(jié)果顯示，丹酚酸組分的平衡溶解度最大值為28.1271 mg·mL-1，最小值為6.20384mg·mL-1，組分油水分配系數(shù)LogP最大值是1.387，最小值是于0.037，Caco-2細(xì)胞的表觀通透系數(shù)P