淫羊藿低糖苷組分轉化規(guī)律、生物藥劑學性質(zhì)及其軟膠囊的初步研究.pdf

1、淫羊藿是傳統(tǒng)的補益類中藥，有強筋骨，祛風濕，補腎陽之功效。本文較全面的查閱了淫羊藿藥理作用的相關報道，發(fā)現(xiàn)淫羊藿在治療骨質(zhì)疏松上得到了廣泛的應用，其發(fā)揮藥效的主要成分為黃酮類化合物。結合本實驗室對淫羊藿十多年來的研究基礎，制備了溶解性和滲透性均較好的淫羊藿低糖苷組分。那么淫羊藿多糖苷向低糖苷轉化時存在怎樣的規(guī)律;所得低糖苷組分與淫羊藿總提取物相比，在藥效上是否具有優(yōu)效性呢？本課題帶著這些疑問展開了探討，具體研究內(nèi)容如下:
　　第二

2、章我們選用四種具有代表性的淫羊藿品種，分別用紫外分光光度法和HPLC法分析了不同品種淫羊藿黃酮成分含量及各成分組成結構差別。使用纖維素酶酶解淫羊藿多糖苷黃酮，以脫去一個或兩個糖苷而轉化為低糖苷;進一步采用AB-8大孔樹脂分離純化，最終獲得淫羊藿低糖苷組分。采用UPLC/Q-TOF-MS分析、表征該組分，結合本實驗室前期研究及文獻報道，辨析出組分包含8種化合物，分別為淫羊藿苷A、大花淫羊藿苷F、寶藿苷Ⅱ、箭藿苷A、箭藿苷B、鼠李糖基淫羊藿

3、次苷、7-O-rhamnosyl icarisideⅡ和寶藿苷Ⅰ。在組分酶解的基礎上，進一步單獨對朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷酶解，朝藿定A7位脫去一分子的葡萄糖生成箭藿苷A;朝藿定B先是7位脫去一分子的葡萄糖生成箭藿苷B，然后又有一部分箭藿苷B3位脫去一分子木糖生成寶藿苷Ⅰ;朝藿定C7位脫去一分子的葡萄糖生成鼠李糖基淫羊藿次苷;淫羊藿苷7位脫去一分子的葡萄糖生成了寶藿苷Ⅰ。
　　第三章通過上述生物轉化工藝獲得了低糖苷組

4、分，本部分進一步評價該組分活性。采用MTT法優(yōu)選了淫羊藿低糖苷組分對大鼠成骨樣細胞UMR-106細胞作用的最佳時間，并分析比較了不同品種淫羊藿低糖苷組分對UMR-106細胞的作用強度，結果表明，朝鮮淫羊藿低糖苷組分在濃度為30μg/mL，作用時間為48 h時，對細胞的增殖作用最為明顯。細胞內(nèi)、外堿性磷酸酶(ALP)活性的測定結果顯示，淫羊藿低糖苷組分(10、20μg·mL-1)能夠顯著增強細胞內(nèi)、外ALP活性，說明淫羊藿低糖苷組分能夠促

5、進成骨細胞的增殖分化。
　　第四章獲得的低糖苷組分具有較好的活性，本部分進一步探討、比較了淫羊藿低糖苷組分(HEFF)相對于淫羊藿提取物(HEE)的優(yōu)效性。
　　首先以切除卵巢的骨質(zhì)疏松大鼠為模型，分別測定各組大鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活性，子宮及股骨濕重，脛骨生物力學性質(zhì)，股骨骨小梁參數(shù)，骨保護素(OPG)、破骨細胞分化因子(RANKL)蛋白表達。實驗結果表明，淫羊藿淫羊藿提取物和低

6、糖苷組分均能較好的改善骨質(zhì)疏松所致的指標變化，但是同等生藥劑量的HEFF與HEE相比，除中劑量組血清StrACP活性和股骨內(nèi)OPG蛋白表達有顯著差異外，其他指標并無顯著性差異，這與我們的預期不相吻合。我們推測可能有以下兩個原因:在此給藥劑量下，大鼠腸道菌群數(shù)量能夠較好的使多糖苷轉化為低糖苷而發(fā)揮藥效;淫羊藿低糖苷分溶解性較差，限制了其生物利用度。為了探究是否由于第一種原因所造成的，作者又選用無完整腸道的骨質(zhì)疏松斑馬魚為模型來進行淫羊藿低

7、糖苷組分優(yōu)效性的評價。
　　將受精后3d（3 dfp）的斑馬魚幼魚隨機分為空白培養(yǎng)基組、0.5％ DMSO溶媒對照組、潑尼松龍組、依替膦酸二鈉組、不同濃度的淫羊藿低糖苷組分(生藥量分別為6.56，13.125，26.25，52.5，105mg·L-1)組和淫羊藿提取物組(生藥量分別為6.56，13.125，26.25，52.5，105 mg·L-1)。每天換液至9 dfp，麻醉致死后采用茜素紅對幼魚骨骼進行染色，然后對骨染色面積及

8、累積光密度進行定量分析。實驗結果顯示HEFF和HEE均可增加骨質(zhì)疏松斑馬魚頭部骨染色面積和累積光密度，具有一定的濃度依賴性，HEFF組與HEE組相比，在生藥濃度為13.125，26.25，52.5，105 mg·L-1時，頭部骨累積光密度具有顯著性差異。
　　第五章淫羊藿低糖苷組分的優(yōu)效性與其生物藥劑學性質(zhì)密切相關。本部分對淫羊藿低糖苷組分的生物藥劑學性質(zhì)進行了研究，并對其進行分類。我們首先測定了組分中八種化合物在水及不同pH的緩

9、沖鹽中的平衡溶解度及油水分配系數(shù);進一步對其相似性進行分析，采用質(zhì)量權重系數(shù)法對組分整體性質(zhì)進行整合表征，計算出組分整體的平衡溶解度及油水分配系數(shù)。結果表明組分平衡溶解度較差，且對pH較為敏感，油水分配系數(shù)LogP介于1.91～3.04之間，提示藥物在腸道內(nèi)具有較好的吸收性。根據(jù)中藥BCS分類系統(tǒng)，淫羊藿低糖苷組分具有低溶解性，高滲透性，屬于Ⅱ類中藥組分。
　　第六章為了解決淫羊藿低糖苷組分在水中溶解性低的問題，遵循中藥實際應用中

10、經(jīng)濟、方便的原則，我們將低糖苷組分設計為以大豆油為基質(zhì)，蜂蠟和大豆磷脂分別為助懸劑和潤濕劑的混懸劑。分別單因素考察處方中各成分的用量，然后用正交法確定了最佳比例為組分∶基質(zhì)∶蜂蠟∶大豆磷脂=1.0∶1.5∶0.1∶0.04，該比例下所得的內(nèi)容物具有較好的穩(wěn)定性和流動性。
　　綜合上述實驗可知，筆者成功的制備出了淫羊藿低糖苷組分，并對淫羊藿多糖苷向低糖苷的酶解轉化規(guī)律進行探討，然后分別以骨質(zhì)疏松大鼠和骨質(zhì)疏松斑馬魚為模型，評價了淫羊